第2节 氨基酸.pptVIP

2005-01-20 XiongYanfei 第2章 氨基酸与蛋白质的一级结构 The Same 20 Amino Acids Serve as Builing Blocks for All Proteins in Nature 带净负电荷的R基氨基酸:2种 Asp and Glu ，在pH 7.0的溶液中带有一个负电荷，常参与蛋白质亚基间的相互作用及酶活性中心的形成。 2.2.2 在近紫外区芳香族氨基酸可产生光吸收 氨基酸在不同pH质溶液中其带电状态不同 原理：不同氨基酸在同一pH条件下带电状况不同，在电场中的移动方向和移动速率不同，电泳一定时间后在介质上的位置不同——迁移率不同 μ=(q/πηγ)·V μ:电泳迁移率 Q：粒子带静电荷 Η：电泳进行时介质的粘度 γ：粒子的半径（cm） V：电压 2.3.5 酸性氨基酸和碱性氨基酸均存在三级解离，可看成是三元酸，增加的一级为侧链上离子化R基团的解离 (pKR). 侧链-COOH与α-COOH的滴定曲线部分重叠, 侧链碱性基团与α-NH2的滴定曲线部分重叠 利用滴定曲线同样可计算其各级解离常数和等电点 生理条件下，只有组氨酸具有明显的缓冲能力 Glu的等电点 pI=(pK1+pKR)/2 =3.22 An acidic amino acid pI=(pK1+pKR)/2 A basic amino acid pI=(pKR+pK2)/2 His： pI=(pK2+pKR)/2 =7.59 理论上讲，R基团不解离的氨基酸，等电状态时，α-COOH完全解离，α-NH3+ 完全不解离. 可推得：pI = (pK1+pK2)/2 (e.g pIGly=5.97) 酸性氨基酸的等电状态为a-COOH 完全解离，R上的COOH和 a-NH3+ 完全不解离. pI = (pK1+pKR)/2 (e.g pIGlu=3.22) 碱性氨基酸的等电状态为α-COOH和α -NH3+ 完全解离，R上的-NH3+或-NH+= 完全不解离， pI = (pKR+pK2)/2 (e.g pIHis=7.59) 2.4 混合氨基酸可通过电泳和各种层析方法分离 分离方法 电泳 纸层析(相对迁移率) 层析 离子交换层析（电荷和非极性） 高效液相层析 2.4.1 分配层析的原理是根据各组分在固定相和流动相中的分配系数不同而被分离 2.4.1 电泳是分离氨基酸的有效方法之一 2.4.2 离子交换层析是分离氨基酸的有效方法 原理：在合成树脂上引入带电基团，作固定相，在一定的pH条件下，各种氨基酸的带电状况不同，与树脂的亲和力力不同，被流动相洗脱的难易程度不同从而被分离. 带正电荷的树脂称作阴离子交换树脂，可吸附带负电荷的氨基酸，带正电的氨基酸不被束缚，先被洗脱； 带负电荷的树脂称作阳离子交换树脂，可吸附带正电的氨基酸，带负电的氨基酸不被束缚，先被洗脱； 氨基酸被洗脱的顺序取决于氨基酸与树脂间的亲和力； 氨基酸与树脂的亲合力主要决定于它们之间的静电吸引,其次是氨基酸侧链与树脂聚苯乙烯之间的疏水相互作用; 亲和力愈大愈难洗脱！ (聚苯乙烯树脂). (二乙胺乙基纤维素). anion-exchange resin (羧甲基纤维素). (鳌合型聚苯乙烯树枝) * * Multimedia Presentation of Biochemistry * 主要内容 1.氨基酸（氨基酸的结构、分类、名称和性质） 2.氨基酸的分离分析（电泳、层析） 3.肽（基本概念、性质、活性肽） 4.蛋白质的分离与鉴定（盐析、层析、电泳） 5.蛋白质一级结构的测定（策略与原理） 2.1.1 对蛋白质组成的各种研究表明，天然蛋白质由20种基本氨基酸组成 酸水解： 碱水解： 酶水解： 2.1 天然蛋白质由20 种基本氨基酸(standard ?-amino acid)构成。 据其来源每一氨基酸均有一个俗名 (trivial name) 如：谷氨酸——小麦面筋(gluten ) 酪氨酸——奶酪(“tyros” in Greek). 每一氨基酸均有一三字母或一字母的缩写符号 （是其英文名称的前三字母或以第一个字母，产生混淆时则用另一字母替换） 2.1.2 每一氨基酸都有一俗名或三子母或一字母缩写名称 谷氨酸（glutamic acid, Glu，“E”） 酪氨酸（tyrosine, Tyr，“Y”） 20种基本氨基