DcR3和CD105标记MVD在宫颈癌中表达及意义.docVIP

DcR3和CD105标记MVD在宫颈癌中表达及意义 　　[摘要] 目的 观察不同宫颈病变组织中DcR3 蛋白和CD105 标记的微血管密度（MVD）的表达情况，进而探讨二者间的相互关系。 方法 采用SP免疫组化法检测42 例宫颈癌、24例宫颈上皮内瘤变和18例宫颈正常组织中DcR3 蛋白的表达情况，并进行CD105 标记的MVD 计数。 结果 宫颈癌组织中DcR3 阳性表达率为85.71%，远高于正常宫颈组和CIN组，三组间经Bonferroni法两两比较后差异均有统计学意义（P 　　[关键词] 宫颈癌；诱导受体3；微血管密度；免疫组织化学 　　[中图分类号] R737.33 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）26-0032-03 　　宫颈癌为常见的妇科肿瘤，其发病率及死亡率仅次于乳腺癌，而且，近10年来，宫颈癌发生有明显上升和年轻化趋势，严重影响女性身心健康[1]。为此早期诊断及早期治疗是关键。已有研究发现宫颈癌血管的生成对肿瘤的发生、发展及转移非常重要，那么影响宫颈癌血管生成及抑制的各项研究则成为国内外学者研究的热点。诱导受体3（decoy receptor 3，DcR3）作为肿瘤坏死因子受体（TNFR）家族的新成员，是一种特殊的细胞凋亡抑制剂，其与肿瘤坏死因子样配体1A（TL1A）结合通过抑制内皮细胞的凋亡而促进新生血管的形成[2]。而CD105 作为血管内皮细胞增殖的标志物，在内皮细胞上高表达，参与了新生血管的生成过程[3]。本文通过免疫组织化学方法检测不同宫颈病变组织中DcR3 蛋白和CD105 标记的微血管密度（MVD）的表达情况，进而探讨二者间的相关性，为临床宫颈癌的诊断、治疗及预后判断提供新思路。 　　1 资料与方法 　　1.1 一般资料 　　于2011年2月～2013 年4月随机收集在我院妇产科门诊行宫颈癌根治术或活检的病理标本84例，其中42例确诊为宫颈癌组织，平均年龄（42.7±5.8）岁（32～67岁），18例未绝经，24例已绝经；宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia，CIN）组织24例，平均年龄（37.0±7.2）岁（27～55 岁），13例未绝经，11例已绝经。同时选择我院同期因子宫肌瘤行子宫全切，且术后病理证实为慢性宫颈炎组织18例作为对照组，平均年龄（34.21±7.3）岁（29～50 岁），8例未绝经，10例已绝经。所有标本由我院病理科协助诊断，且有确切随访资料，各组患者术前均未行放化疗，半年内未经过激素治疗。宫颈癌患者的临床分期则按照FIGO 的诊断标准[4]。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期分别为16、22和4例，其中手术32例：Ⅰ期12例，ⅡA期8例，ⅡB期12例，经术后病理确诊有淋巴结转移者10例，无淋巴结转移者22例；组织学类型腺癌8例，鳞癌34例。 　　1.2 试剂来源 　　鼠抗人CD105 单克隆抗体（即用型，福州迈新生物公司）；鼠抗人DcR3 单克隆抗体（捷克BioVendorLaboratory Medicine 公司）；SP 免疫组化试剂盒和DAB染色试剂盒（北京中衫金桥生物公司）。 　　1.3检测方法 　　1.3.1 SP染色测定 DcR3和CD105的检测均采用SP染色技术，阳性对照为已知的阳性标本，空白对照为PBS缓冲液。实验操作步骤严格按照试剂盒说明书进行。具体步骤如下：①取经福尔马林固定、石蜡包埋的标本，连续切片；②常规脱蜡水化；③用3%H2O2-甲醇液灭活内源性过氧化物酶活性；④组织抗原沸水浴修复15 min，自然冷却至室温；⑤滴加10%正常山羊血清封闭液，室温孵育20 min，甩去多余的液体；⑥滴加一抗，37℃室温下复温45 min后4℃过夜；⑦滴加辣根过氧化物酶标记的二抗，室温静置1 h；⑧滴加链霉亲和素-过氧化物酶，室温下孵育1 h；⑨DAB 显色5 min（显微镜下掌握染色程度），自来水冲洗10 min终止反应；⑩苏木精复染2 min，自来水冲洗10 min；常规脱水、透明、封片，镜检并拍照（所有步骤之间均用PBS冲洗2～3次，每次5 min）。 　　1.3.2 结果判定 （1）DcR3表达结果判定：DcR3蛋白的表达主要在细胞核和（或）细胞质，细胞核和（或）胞质内有棕色或棕褐色颗粒即为阳性细胞。每张切片随机选取5个具有代表性的高倍野，对免疫组化结果进行评估。采用Gatalica等[5]的半定量方法，分别对染色强度（无特异性染色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分）和阳性细胞百分率（阳性细胞数75%为3分）进行计分；每张切片以两种计分相乘的结果作为免疫组化评分：阴性（-），0分；弱阳性（+），2～3分；中等阳性（++），4～6分；为强阳性（+++），6分。所有