p21、p53基因表达及其单核苷酸多态性与肝细胞肝癌关系.docVIP

p21、p53基因表达及其单核苷酸多态性与肝细胞肝癌关系 　　[摘要] 目的 探讨肝细胞肝癌患者p21和p53基因的表达及其单核苷酸的多态性，分析其与肝细胞肝癌的关系。 方法 选择50例肝细胞肝癌患者和50名健康志愿者，采用PCR技术检测两组外周血白细胞中的p21和p53基因的表达情况，采用PCR-RFLP方法检测p21 3’UTR位点以及p53 intron 6 位点的基因多态性。 结果 肝癌组p21和p53 mRNA表达显著高于对照组（P 　　[关键词] 肝细胞肝癌；p21；p53；基因表达 　　[中图分类号] R735.7 [文献标识码] B [文章编号] 1673-9701（2013）17-0006-04 　　肝细胞肝癌的恶性程度高，严重危害患者的健康和生命，肝细胞肝癌因起病隐匿、进展快、病程短，一旦发现患者多已经进入晚期，因此死亡率高，在我国肿瘤死亡谱中占第二位[1]。随着医学的发展，肝癌在诊断、治疗等方面有了较大的发展，但是其死亡率仍然较高，因此研究其发病机制，开展一、二级预防具有重要的意义。p21是肿瘤细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶[2]，p53是抑癌基因[3]，两者的突变、基因缺失、遗传形状改变均会导致细胞周期异常而发生恶性肿瘤。本研究分析50例肝细胞肝癌患者p21、p53基因的表达情况以及其单核苷酸多态性，分析其与肝细胞肝癌的关系，现将结果报道如下。 　　1 资料与方法 　　1.1一般资料 　　2011～2012年选择在我院治疗的肝细胞肝癌患者50例为研究对象。纳入标准：根据临床症状、体征、血清肝癌标志物、肝组织病理学活检等确诊为肝细胞肝癌，不伴其他器官的恶性肿瘤以及肝脏转移，未接受抗癌治疗。另选择50例健康志愿者为对照组，纳入标准：无肿瘤病史、无遗传疾病、无其他系统严重的疾病，按照性别、年龄等一般资料匹配原则进行选择。见表1。 　　1.2标本采集 　　采集研究对象清晨空腹静脉血4 mL于含有0.2 mL抗凝剂的真空抗凝管中，混匀。4 h内取2 mL提取总的RNA，剩余的2 mL用于提取基因组DNA。 　　1.3检测方法 　　分析采用多因素Logistic回归分析。P 　　p21对细胞周期的调节通过两种途径实现，一种是依赖p53的途径，一种是非依赖p53的途径。本研究的结果显示肝癌细胞p21基因与p53基因的表达量没有明显的相关性。可能的原因是由于p21基???通过其他的途径进行调节细胞周期。 　　单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP），主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性[8]。SNP所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换（transition）或颠换（transversion）所引起，也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的SNP并不包括后两种情况。通常所说的SNP都是二等位多态性的。这种变异可能是转换（C←→T，在其互补链上则为G←→A），也可能是颠换（C←→A，G←→T，C←→G，A←→T）。转换的发生率总是明显高于其他几种变异，具有转换型变异的SNP约占2/3，其他几种变异的发生几率相似。p21基因的单核苷酸多态性主要是第2外显子的31密码子中，C→A，丝氨酸转变为精氨酸。此多态性位点发生改变，可导致对细胞G1期的调控丧失。另一个多态性位点是核苷酸出现C→T改变，与mRNA的稳定性、细胞的增殖、肿瘤生长转移有关。p53有三个多态性位点和肿瘤的发生具有相关性[9，10]。一个位点是精氨酸由脯氨酸取代，一个是第6内含子G→A改变，一个是第三内含子的突变。在本研究中，p21 3’UTR C/T位点的C/C、C/T、T/T基因频率与健康对照组比较，差异不显著，校正性别、年龄、家族史、饮酒、??烟、HBV感染等因素后，回归分析显示，与C/C型相比，T/T和C/T基因型与患者患肝癌的风险无相关性，携带至少一个突变等位基因T与肝癌的患病也没有相关性。对患者按照年龄和性别进行进一步的分层分析，p21 3’UTR位点的T/T+C/T基因型可增加60岁以上人群肝癌分先。肝癌患者p53基因内含子6 G/A位点G/G、G/A、A/A基因型频率与对照组比较，差异不显著。校正年龄、家族史、性别、饮酒、吸烟、HBV感染等相关因素后，回归分析显示，与G/G基因型比较，G/A和A/A基因型与肝癌的患病风险没有相关性。携带至少一个突变基因A与肝癌患者患病的风险也没有相关性。这与既往的研究不甚一致。原因可能是既往的研究主要是肺癌，不同的肿瘤对基因多态性位点的敏感程度不同，另外，对于不同的人群，遗传性状也会不同。 　　综上所述，p21基因以及p53基因的高表达可能与肝细胞肝癌有一定的相关性，饮酒能够使肝癌患者