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人参皂苷CK抗炎及神经保护作用研究 　　[摘要] 目的 观察人参皂苷CK的抗炎及神经保护作用并探讨其作用机制。 方法 ①复制脂多糖（LPS）诱导小鼠败血症模型，观察人参皂苷CK对脑内小胶质细胞变化及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白细胞介素-1β（IL-1β）的影响；②复制大鼠脑缺血再灌注损伤模型，观察人参皂苷CK对脑梗死灶体积百分比和小胶质细胞变化的影响；③原代培养小胶质细胞，观察人参皂苷CK对LPS诱导的细胞激活及培养液中一氧化氮（NO）含量和细胞内活性氧（ROS）含量变化的影响。 结果 ①模型对照组脑内TNF-α [（198.38±12.84）mg/L]和IL-1β [（845.15±41.97）ng/L]含量明显高于正常对照组[（106.71±11.21）mg/L、（477.46±49.76）ng/L]，阳性对照组[（141.46±11.91）mg/L、（690.94±54.71）ng/L]和人参皂苷CK低[（157.23±12.25）mg/L、（726.04±64.29）ng/L]、中[（136.58±13.17）mg/L、（651.88±55.65）ng/L]、高[（121.33±12.09）mg/L、（577.36±51.86）ng/L]剂量组，差异均有统计学意义（P 　　[关键词] 人参皂苷CK；小胶质细胞；败血症；脑缺血 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）07（c）-0013-05 　　小胶质细胞是中枢神经系统的主要免疫细胞，存在静息和激活两种状态，在脑缺血损伤、炎症反应、神经退行性疾病发生时易被激活并分泌多种炎症因子，如肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor，TNF-α）、白细胞介素-1β（interleukin-1，IL-1β）和活性氧（reactive oxygen species，ROS），一氧化氮（nitric oxide，NO）等细胞毒性物质[1-2]。因此，抑制小胶质细胞激活的药物对治疗神经系统病变具有重要意义。人参皂苷CK[20-O-β-D-葡萄糖基-20（S）-原人参二醇，compound K，CK]是原人参二醇型人参皂苷Rb1、Rb2和Rc等在人体内主要吸收形式和药效实体，具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、抗糖尿病、抗过敏等，并可通过多种途径发挥抗炎作用[3-5]。同时，原人参二醇型人参皂苷的神经保护作用也得到了充分认识[6-7]。本课题旨在观察人参皂苷CK的抗炎及神经保护作用并探讨其作用机制，为其成为治疗神经系统病变的药物提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 实验动物 　　ICR小鼠120只（雄性，SPF级，18～22 g）；SD大鼠70只（雄性，4～5个月，SPF级，180～220 g）；新生SD大鼠1只（2 d）由北京维通利华实验动物技术有限公司提供，所有动物实验均符合广东省和深圳市龙岗中心医院关于实验动物福利和伦理学的要求。 　　1.2 试剂 　　人参皂苷CK（四川维克奇生物科技有限公司，HPLC≥98%）；过氧化物酶标记的链霉卵白素-亲和素SP试剂盒（北京中山生物技术公司）；小鼠肿瘤坏死因子-α（TNF-α）ELISA试剂盒（上海易利生化试剂有限公司）；小鼠白细胞介素1β（IL-1β）ELISA试剂盒（上海沪峰化工有限公司）；细胞内活性氧（ROS）红色荧光测定试剂盒（上海杰美基因医药科技有限公司）。脂多糖（LPS）、地塞米松、生物素标记的B4凝集素购自Sigma公司；DMEM/F12培养基、胎牛血清购自Gibco公司，其他试剂均为国产分析纯。 　　1.3 方法 　　1.3.1 人参皂苷CK对LPS诱导小鼠败血症的影响 　　1.3.1.1 分组、给药及造模 ICR小鼠120只，随机分为6组，即正常对照组、模型对照组、阳性对照组（地塞米松30 mg/kg）、人参皂苷CK低、中、高剂量组（10、20、40 mg/kg），每组20只。正常对照组和模型对照组给予生理盐水，阳性对照组给予地塞米松30 mg/kg，人参皂苷CK低、中、高剂量组分别给予人参皂苷CK 10、20、40 mg/kg，腹腔注射，0.1 mL/10 g，连续给药7 d，末次给药后30 min，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射LPS 5 mg/kg（0.1 mL/10 g）。 　　1.3.1.2 指标测定 ①胶质细胞凝集素标记染色：注射LPS 3 h后，每组随机选取10只小鼠麻醉处死，取脑，快速脱水，低温石蜡包埋，冠状组织切片（厚度约30 μm，间隔600 μm），37℃恒温箱中脱蜡至水，加入含3% H2O2的甲醇室温孵育10 min，PBS冲洗3次，每次3 min，加入生物素标记的B4凝集素（终浓度5