第3篇 高效液相色谱分析.pptVIP

高效液相色谱法：流动相——液体（也称洗脱液） 在经典色谱法的基础上引入气相色谱的理论，技术上采用了高压泵、高效固定相和高灵敏检测器，建立了分析速度快、分离效率高和灵敏度高的色谱方法。 高压：150-350×105 Pa 高速：1-10 mL/min 高效：大于30000塔板/米 高灵敏：10-9g （紫外检测）、10-11g （荧光检测） 一、HPLC与GC差别 1．分析对象的区别 GC：适于能气化、沸点较低、热稳定性好的样品；但对高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及高聚物的样品，尤其对大多数生化样品不可检测。 占有机物的20%（能测定） HPLC：不受样品挥发性和热稳定性的限制，对分子量大、难气化、热稳定性差的生化样品及高分子和离子型样品均可检测。 用途广泛，占有机物的80% 2．流动相作用的区别 GC：流动相为惰性，气体组分与流动相无亲合作用力，只与固定相有相互作用。 HPLC：流动相为液体，流动相与组分间有亲合作用力，能提高柱的选择性、改善分离度，对分离起正向作用。且流动相种类较多，选择余地广，改变流动相极性和pH值也对分离起到调控作用，当选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相也可以增大分离选择性。 3．操作条件主要差别 GC：加温操作 HPLC：室温；高压（液体粘度大） §3-2 基本理论和条件选择 讨论： （与GC对比） 1）涡流扩散项 (与GC相同) 2）纵向扩散项 3）传质阻力项c.u 1. 固定相的选择： 选粒径小的、分布均匀的球形固定相 （dp≤10μm） 首选化学键合相 2. 流动相及其流速的选择： 选粘度小、低流速的流动相——甲醇， 约1ml/min 3. 柱温的选择： 选室温250C左右 一、液固吸附色谱法（LSC） 二、液液分配色谱法（LLC） 三、离子对色谱法（IPC） 四、离子交换色谱法（IEC） 五、离子色谱法（IC） 六、空间排阻色谱法（SEC） 基本原理： 2．固定相：与GC比，固定相粒径不同（10μm） 2.固定相 （3）化学键合固定相： 化学键合相 特点： 表面没有液坑 不易流失，稳定性好 适合于多种色谱类型及试样分析 适于梯度洗脱 反相键合相色谱，已成为应用最广泛的分支。 分析实例： 三、离子对色谱 （ion pair chromatography） 基本原理： 分析实例： 四、离子交换色谱 离子交换基本原理 离子交换色谱分离固定相 离子交换分离实例 五、离子色谱法 离子色谱仪 六、空间排阻色谱法steric exclusion chromatography 空间排阻色谱固定相 分析实例： §3-4 液相色谱的流动相 1.选择流动相时应注意的几个问题 2. 流动相类别 3. 流动相选择 §3-5 高效液相色谱仪 流程及主要部件 2.主要部件 (2) 梯度淋洗装置 (3) 进样装置 六通阀进样演示 　　　　　 (4) 色谱柱 (5) 液相色谱检测器 b. 光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器 c. 示差折光检测器（Differential refractive index detector） d. 荧光检测器（Fluorescence detector） (Ion Chromatography，简称IC) 在离子交换色谱法的基础上，于20世纪70年代出现、80年代迅速发展起来的液相色谱法，并快速发展成为水溶液中阴离子分析的最佳方法。 　　其基本思路是：离子交换柱交换离子，电解质溶液洗脱，用电导检测器检测。但电解质背景离子对电导检测器有干扰，设置抑制柱。 典型的为双柱型离子色谱仪。 非抑制型: 当进一步降低分离柱中树脂的交换容量(0.007～0.07mmol/g干树脂),使用低浓度、低电离度的有机弱酸及弱酸盐作淋洗液，如苯甲酸、苯甲酸盐等。检测器可直接与分离柱相连，不需抑制柱。 固定相：凝胶(具有一定大小孔隙分布)； 原理：按分子大小分离。小分子可以扩散到凝胶空隙中通过，出峰最慢；中等分子只能通过部分凝胶空隙，中速通过；而大分子被排斥在外，出峰最快；溶剂分子小，故在最后出峰。 相对分子质量在100～105范围内的化合物按质量分离。 （1）软质凝胶 葡聚糖凝胶、琼脂凝胶等。多