生物化学·DNA复制和修复.pptVIP

DNA的修复主要有以下类型: 二、 直接修复（光裂合酶） 五、诱导修复（SOS修复） 三、切除修复 四、重组修复 一、错配修复（核酸外切酶切除，聚合酶修复） DNA紫外线损伤的光裂合酶修复 1、形成嘧啶二聚体 影响DNA双螺旋结构 2、光复合酶结合于 损伤部位 3、酶被可见光激活 4、修复后酶被释放 DNA的损伤和切除修复 碱基丢失 碱基缺陷或错配 结构缺陷 切开 核酸内切酶 核酸外切酶 切除 DNA聚合酶 DNA连接酶 核酸内切酶 核酸外切酶 切开 切除 修复 连接 糖苷酶 插入酶 碱基取代 DNA的重组修复 胸腺嘧啶二聚体 复制 核酸酶及重组蛋白 修复复制 DNA聚合酶 DNA连接酶 重组 SOS反应的机制 未诱导的细胞 靶基因 lexA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 recA基因被LexA 蛋白质部分阻遏 （?40个不同的位点被阻遏） LexA(阻遏物) RecA(辅蛋白酶) 靶基因表达 lexA靶基因表达 但产物被分解 recA大量表达 RecA促使分解LexA 诱导的细胞 单链DNA ATP 修复酶 第三节 DNA的突变 DNA分子中的核苷酸序列发生突然而稳定的改变，从而导致DNA的复制以及后来的转录和翻译产物随之发生变化，表现出异常的遗传特性，称为DNA的突变。它包括由于DNA损伤和错配得不到修复而引起的突变，以及由于不同DNA分子之间的交换而引起的遗传重组。 二、诱变剂的作用（大多为致癌剂） ?碱基类似物(base analog) ?碱基修饰剂(base modifier) ?嵌入染料(intercalation dye) (插入碱基对之间) ?紫外线(ultraviolet)和电离辐射(ionizing radiation) 一、突变的类型 ?碱基对的置换(substitution) ?移码突变(framesshift mutation) DNA突变的类型 -T-C-G-G-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-C-G-A-C-A-T-G-C- 转换 野生型基因 -T-C-G-A-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-T-G-A-C-A-T-G-C- -T-C-G-C-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-G-G-A-C-A-T-G-C- 颠换 碱基对的置换(substitution) 移码突变 (framesshift mutation) -T-C-G-C-A-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-G-T-G-A-C-A-T-G-C- 插入 -T-C-G-C-T-G-T-A-C-G- -A-G-C-G-A-C-A-T-G-C- 缺失 T A 问答题 1、DNA复制的高度准确性是通过什么来实现的？ 2、论述原核生物DNA的复制过程。 中心法则　 半保留复制　 　 反转录 冈崎片段 DNA聚合酶的3′- 5′外切酶水解位点 3′ 3′ 5′ 5′ 错配碱基 3′- 5′核酸外切酶水解位点 2、 DNA聚合酶Ⅱ 活力比聚合酶Ⅰ高； 反应需Mg2+、NH4+； 以带缺口的ds DNA为模板，反应同酶Ⅰ； 具3’→5’外切酶活性；但无5’→3’外切酶活力; 是一种修复酶而非复制酶。 3、DNA聚合酶 Ⅲ 由多个亚基组成的蛋白质，是大肠杆菌细胞内真正负责DNA链延伸的复制酶； 具3’ → 5’外切酶活性； 活性高 大肠杆菌DNA聚合酶Ⅲ全酶的结构和功能——10种亚基 DNA聚合酶Ⅲ 两个?亚基夹住DNA DNA聚合酶Ⅲ异二聚体 核心酶 帮助β亚基 校对 促使核心酶二聚化 聚合活性 组建核心酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? 引物的结合和识别，形成夹子 大肠杆菌三种DNA聚合酶比较 DNA 聚合酶Ⅱ 分子量 每个细胞的分子统计数 5′-3 ′聚合酶作用 3′-5 ′核酸外切酶作用 5′-3 ′核酸外切酶作用 聚合能力 DNA 聚合酶Ⅰ 109,000 400 + +（纠错） +（切引物） 弱 120,000 100 + + - 一般 400,000 10-20 + + - 强 比较项目 DNA 聚合酶Ⅲ 切除引物 损伤修复 修复酶非 复制酶 复制 功能 1999年发现聚合酶Ⅳ和Ⅴ，它们涉及DNA的错误倾向修复（errooune repair） *DNApolⅢ主要负责DNA链延伸。 DNA连接酶(ligase)： 作用：催化相邻的二个DNA片段间5’－磷酸基团和3’－羟基生成磷酸二酯键而连接。 条件：①两片段相邻；②两片段需与同一互补链结合;③反应耗能。 拓扑异构酶（topoisomerase）兼具内切酶和连接酶活力，能迅速将DNA超螺旋或双螺旋紧张