2.2-土壤中分解尿素细菌分离和计数课件.pptVIP

1.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法：稀释涂布平板法。 （2）原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 （3）过程： ①选平板（选择菌落数在30——300个菌落的三个平板） ②统计每个平板的菌落数目取平均值 ③计算每克样品中的菌落数 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 三、微生物的计数 除此外还有滤膜法 (4)现有一升水样，用无菌吸管吸取1 mL水样至盛有9 mL无菌水的试管中，依次稀释103稀释度。各取0.1 mL已稀释103倍的水样分别接种到三个培养基上培养，记录的菌落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为________。 (55＋56＋57)÷3÷0.1×103×103＝5.6×108。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④统计结果一般用菌落数而不是用活菌数来表示。 ※课本P22　比较教材中两位同学的操作方法，哪位同学的结果接近真实值？你认为这两位同学的实验需要改进呢？如需要，如何改进？ ――第二位。两位同学的实验都需要改进：第一位同学需设置重复实验组，涂布至少3个平板； 第二位同学统计的三个平板菌落数相差太大，说明操作有误，需要重新实验。 2、显微镜直接计数：抽样检测法 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点： 【对应训练3】 检测员将1 mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量；将盖玻片放在计数室上，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体。已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为0.1 mm3 现观察到图中该计数室所示a、b、c、d、e 5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则上述水样中约有蓝藻?? 个／mL。 5n×105? 原液所含细菌数/ml＝每小格平均细菌数×400×l04×稀释倍数 平板划线法 稀释涂布平板法 接种环 涂布器 分离技术 平板划线法 稀释涂布平板法。 接种技术 计数技术 显微镜直接计数法 间接计数法（活菌计数法）：稀释涂布平板法 无菌技术 消毒 灭菌 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 四、设置对照： 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌落数目的实验时，A同学从对应的106倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约50个菌落。 原因：⑴土样不同，⑵培养基污染或操作失误(或者是混入了其他的含氮物质) 小结：实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 五.细菌分离与计数的实验流程 土壤取样→制备培养基 样品稀释→取样涂布→微生物的培养→观察并记录结果→细菌计数 ㈠.土壤取样 土壤中的微生物，大约70%-90%是细菌。细菌适宜在 的 潮湿土壤中生长，绝大多数分布在距土表约3-8cm的土壤层。因此土壤取样时，一般要铲去 。 ㈡.制备培养基： 制备以 的选择培养基。 表层土 酸碱度接近中性的 尿素为唯一氮源 样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数，分离不同的微生物采用不同的稀释度 原因： 。 目的： 。 [三]样品的稀释 不同微生物在土壤中含量不同 保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 细菌稀释度选 。 放线菌稀释度 。 真菌的稀释度 。 104 105 106 103 104 105 10