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蛋白质工程与蛋白质组研究 化学与生物工程学院 主讲人：冉秀芝 Tel图1-1 在大肠杆菌中基因表达的3个重要信号 图1-3 通过表达载体在大肠杆菌中被表达 图1-4 杂交基因的构建和融合蛋白的合成 图1-5 在大肠杆菌中表达外源基因长遇到的问题 在真核细胞中表达重组蛋白 用酵母和丝状真菌表达重组蛋白（酿酒酵母） 动物细胞中表达重组蛋白（哺乳动物、昆虫） 利用活的动物和植物生产重组蛋白（生物体制药） 图1-6 真核细胞表达载体常用的4种启动子 图1-7 将转基因体细胞的细胞核转入卵母细胞 携带人血清白蛋白基因的转基因试管牛“滔滔” 从植物中获得重组蛋白 2 蛋白质工程 2.1 什么叫蛋白质工程 指通过改造与蛋白质相应的基因中的碱基顺序，或设计合成新的基因，将它克隆至受体细胞中，通过基因表达而获得具有新的特性的蛋白质（酶）技术。 这是一门从改变基因入手，定做新的蛋白质的技术。故有人将其称为“第二代基因工程” 1983年，美国生物学家额尔默首先提出了“蛋白质工程”的概念。 2.4 蛋白质工程的应用 酶特性的改造 包括酶催化活性、专一性、稳定性等的改造。 蛋白质或肽类药物的改造和新药的研制 第14章  主讲人：冉秀芝 化学与生物工程学院 E-mail:ranxiuzhi2006@cqit.edu.cn 3 基因克隆和DNA分析在医学中的应用 重组药物的生产 人类疾病相关基因的识别和鉴定 基因治疗 3.1重组药物的生产 3.1.1重组胰岛素 3.1.2在大肠杆菌中合成人生长素 3.1.3重组凝血因子Ⅷ 3.1.4其他人类蛋白质的合成 3.1.5重组疫苗 图3-1胰岛素的分子结构和从前胰岛素原合成胰岛素的简要过程 图3-2 由人工合成的A,B链的基因合成重组胰岛素 图3-3重组促生长素抑制素的合成 图3-4重组生长素的合成 图3-5 凝血因子Ⅷ基因及其翻译产物 重组凝血因子Ⅷ合成的几种方法 干扰素的合成 图3-7 利用分离的病毒壳体蛋白作疫苗的原理 转基因植物生产重组蛋白疫苗 HbsAg 麻疹病毒 呼吸道合胞病毒 集几种疫苗于一体 图3-8 重组牛痘病毒可能用途的基本原理 表3-2 在重组牛痘病毒中表达的外源基因 3.2人类疾病相关基因的识别和鉴定 3.2.1 遗传性疾病基因识别的重要 3.2.2 如何识别遗传病基因 图3-9 连锁和非连锁基因的遗传形式 图3-10 乳腺癌基因图谱分析 甲型血友病的基因诊断（连锁分析1） 甲型血友病的基因诊断（连锁分析2） 3.3 基因治疗 3.3.1遗传病的基因治疗 3.3.2基因治疗与癌症 3.3.3基因治疗带来的伦理问题 图3-11 转染干细胞的分化，使所有成熟血细胞都含有新的基因 4 植物基因工程的研究 ——基因克隆和DNA分析在农业中的应用 化学与生物工程学院 冉秀芝 主要研究应用的领域 4.1.1培育抗虫植物 4.1.2抗除草剂作物 4.1.3其他利用基因添加的例子 传统杀虫剂与理想杀虫剂 图4-2 δ-内毒素的作用方式 图4-3 基因工程改造玉米的重要步骤 在叶绿体中合成δ-内毒素基因 阻止昆虫对δ-内毒素的抗性（三种策略，图15.5） 图4-4草甘膦作用机制 “抗农达”作物——含抗草甘膦的EPSPS 新一代草甘膦抗性作物——利用GAT降解草甘膦 表4-1 植物基因添加的例子 4.2 基因消减 4.2.1反义技术的原理 4.2.2反义RNA与耐贮藏转基因番茄 4.2.3在植物基因工程中利用反义RNA的其他例子 图15.8 反义RNA 图15.9 反义RNA抑制基因表达可能的原理 图15.11使用反义RNA抑制多聚半乳糖醛酸酶 使用反义RNA抑制乙烯合成——抑制ACC合成酶 表15.3 植物基因敲除的例子 15.3 转基因植物的问题 15.3.1选择性标记的安全性 15.3.2终止技术 15.3.3转基因植物可能对环境产生危害 图4-5 Cre重组酶对DNA的剪切 图4-6 终止技术 调节花的颜色 矮牵牛 二氢黄烷醇还原酶 甜味 西非竹竽 奇异果甜蛋白 改善硫含量 巴西坚果 富甲硫氨酸蛋白 雄性不育 大肠杆菌 DNA腺嘌呤甲基化酶 抗除草剂 烟草 乙酰乳酸合酶 抗病毒 各种病毒 卫星RNAs 抗真菌 紫花苜蓿 葡聚糖酶 经过改良的植物被赋予的特征 组织来源 基因 启动子 反向基因 反义RNA 与原来的mRNA正好反向互补 启动子 正向基因 mRNA 转录 转录 mRNA 反义RNA mRNA 反义RNA 被核糖核酸酶降解？ 不能与核糖体连接？ BACK 反义多聚半乳糖醛酸酶基因 启动子 聚腺苷酸