法医物证课血痕检验.pptVIP

第五节 血痕的个人识别personal identification 一）吸收试验 1.原理：血痕中的A、B、H血型物质，能与相应的抗－A，抗－B，抗－O抗体发生特异性结合，使抗血清中的游离抗体减少或消失，不能再与相应的A，B，O型指示红细胞发生凝集反应。若血痕中无某种ABH抗原，则不能抑制抗血清中的相应抗体，抗体与相应的指示红细胞会发生凝集反应，其反应强度没有变化。根据抗血清与血痕吸收反应前后的效价的变化情况，判断血痕的ABO血型。 二）解离试验 1、原理：血痕中的A、B、H血型物质，能与相应的抗－A，抗－B，抗－O抗体发生特异性结合，这种特异性结合是可逆的，56℃加热后，血痕上抗原结合的抗体可以解离下来，用已知的A，B，O型指示红细胞检测解离液中的抗体。红细胞发生凝集者为解离试验阳性。红细胞不发生凝集者为解离试验阴性。综合反应结果，判断血痕的ABO血型。 三）混合凝集试验  （红细胞粘连试验） 1.原理：抗A，抗B抗体多为IgM, 其分子上有多个抗原结合位点，血痕与足量的抗体反应后，抗体结合到血痕相应的抗原上，形成Ag－Ab复合物，但抗体的抗原结合部位未被占满，还可以与指示红细胞发生抗原抗体反应，形成Ag－Ab－指示红细胞复合物。指示红细胞黏附于血痕上位阳性反应，不黏附为阴性反应。 二、血痕的血清型测定 常用的血清型：Hp, Gc, Gm, Km, Tf等 检测方法：与血清相似。 1.检材的处理： Hp 以氯仿抽提去除血红蛋白 1cm2检材＋25％蔗糖 2-3min 0.3ml氯仿，离心 2. 多采用电泳+免疫固定， 或电泳+免疫固定+ELISA 3、判型 三、血痕的红细胞酶型 酶蛋白在血痕中的改变 1.酶的活性改变，不可逆。 2.酶的结构改变：残基脱落，负电荷增加， 谱带数量、位置改变。 3.形成可逆的二硫化物，可用还原剂使酶蛋白复原。 检测方法 电泳＋酶活性显色 血痕检测常用的酶型 EAP, EsD, PGM, G6PD,GLOⅠ 四、血痕的DNA分析 当前血痕分析的常规技术 关键步骤：DNA提取 常用的DNA提取方法: 有机溶剂法：纯度高，得率低。 chelex法：纯度低，得率高。 常用的DNA分析技术：STR, HLA-DQ,mtDNA 五、血痕的性别鉴定 X,Y性别染色体形态鉴定 性激素 DNA分析：扩增性染色体上的特异性片断。 性别DNA分析技术 1. 牙釉基因（amelogenin,AMG） AMG: Xp22，编码牙原基牙釉质蛋白。 AMGL: Y染色体中心粒附近，与AMG有90％同源性。 一对特异性引物。 男性：977bp, 788bp 女性： 977bp 扩增产物长，不适合陈旧腐败检材 2. ZFY/ZFX基因 ZFY: Y染色体，编码一种锌指状蛋白。 ZFX: X染色体，与ZFY有同源序列。 三条引物。 男性：340bp, 488bp 女性： 488bp 结果准确，无假阳性 扩增Y染色体特异性DNA片断 以Alu为对照， 男性： Alu ，特异性扩增片断 女性： Alu AMG， ZFY/ZFX常用，结果可靠 小结 本节主要解决血痕是谁的问题（个人识别）。要通过对血痕遗传标记（血型）的检测来完成。 可用于血痕个人识别的遗传标记：红细胞血型，血清型，酶型，DNA等。 本节主要介绍了血痕的ABO血型测定方法： 吸收试验；解离试验；混合凝集试验 （红细胞粘连试验） 小结 吸收试验；方法可靠，捡材用量大。 解离试验；灵敏，适于微量捡材。 混合凝集试验：与解离试验类似，更适于涂片，组织切片的血腥测定。 其他血型的测定与新鲜血液的血型测定类似。 5、注意事项： 1）抗血清效价要高： 64x 2）指示红细胞浓度要低：0.1—0.2%，新鲜。 3）关键步骤是洗涤；洗涤不足——假阳性 洗涤过分——假阴性 4）注意O型血的判定：应做抗H。 5）对照：阴性：无血痕检材基质， 阳性：已知A,B血痕。 1、原理； 吸附