生物技术制药复重点附答案.docVIP

第一章 绪论 生物技术：（Biotechnology）以生命科学为基础，利用生物体（或生物组织、细胞及其组分）的特性和功能，设计构建具有预期性状的新物种或新品系，并与工程相结合，利用这样的新物种（品系）进行加工生产，为社会提供商品和服务的一个综合性技术体系 生物技术制药：就是利用基因工程技术、细胞工程技术、微生物工程技术、酶工程技术、蛋白质工程技术、分子生物学技术等来研究和开发药物，用来诊断、治疗和预防疾病的发生。DNA重组技术。将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建成工程菌；实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 基因工程药物：?利用DNA重组技术生产出来的药物被称为基因工程药物 限制性核酸内切酶：是一类能够识别双链DNA分子中的某种特定核苷酸序列，并由此切割双链DNA双链结构的核酸内切酶。它们主要是从原核生物中分离纯化出来的。 编码区：是基因功能发挥的结构基因（或称功能基因），调控序列和启动子起调控启动作用，终止的非编码区属于调控基因。 凝胶过滤层析：是以多孔性凝胶填料为固定相，按分子大小对溶液中各组分进行分离的液相层析方法。 亲和层析：是利用固定化配体与目的蛋白质之间非常特异的生物亲和力进行吸附，这种结合既是特异的，又是可逆的，改变条件可以使结合解除。 疏水层析：是利用蛋白质表面的疏水区域和固定相上疏水基团之间的相互作用力差异，对蛋白组分进行分离的层析方法。 离子交换层析：是依据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时结合力大小的差别而进行分离的一种层析方法。 融合蛋白：由一条短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的，称为融合蛋白。 包涵体：是无定形的蛋白质的聚集，不被任何膜所包围。 它是致密的不溶性蛋白和RNA的凝聚体，包含大部分的表达蛋白。 1.利用基因工程技术生产药物的优点 答：1)大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障；2)可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围；3)可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质；4)内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除；5)可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 2.基因工程药物制造的主要步骤 答：目的基因的克隆；构建DNA重组体；将DNA重组体转移入宿主菌构建工程菌；工程菌的发酵；外源基因表达产物的分离纯化；产品的检验等。 3.化学合成目的基因的先决条件 答：较小的蛋白质或多肽的编码基因可以采用人工化学合成，其先决条件：已知目的基因的核苷酸序列或蛋白质的氨基酸序列，按相应的密码子推导出DNA的碱基序列。 4.人工合成基因的限制有哪些 答：1)不能合成太长的基因，50~60个碱基对；2)人工合成碱基对时，遗传密码的简并会为选择密码带来很大的困难；3)费用高。 5.基因工程宿主菌应满足那些要求？目前应用最广泛的宿主菌有哪些 答：1)容易获得较高浓度的细胞；2)能利用廉价易得的原料；3)不致病、不产生内毒素；4)发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；5)容易进行代谢调控；6)容易进行DNA重组技术操作；7)产物的产量、产率高，产物容易提取。 宿主菌可分两大类：1)原核细胞：大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、链霉菌；2)真核细胞：酵母菌、丝状真菌、哺乳动物细胞。 6.表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些 答：（1）能够独立的复制；有复制起点，有严紧型和松弛型，严紧型伴随宿主染色体的复制而复制，在宿主细胞中拷贝少（1-3）；松弛型的复制可不依赖与宿主细胞，在宿主细胞中拷贝多达3000个。1)细菌细胞的质粒。2)λ噬菌体载体。 7.真核基因在大肠杆菌中的表达形式 答：有三种形式：(1)融合蛋白的表达形式由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白(2)非融合蛋白的表达形式(3)分泌型表达形式（1）、融合蛋白融合蛋白（2）、非融合蛋白非融合蛋白优点：能够较好地保持原来的蛋白活性；缺点：容易被蛋白酶破坏，氨基末端常常带有甲硫氨酸，在人体内用药时可能会引起人体免疫反应。（3）、分泌型将外源基因 答：通过将具有亲和力的两个分子中一个固定在不溶性基质（也称载体）上，利用分子间亲和力的特异性和可逆性，对另一个分子进行分离纯化。（被固定在基质上的分子称为配体，配体与基质共价结合，构成亲和层析的固定相，称为亲和吸附剂。） 13.凝胶过滤层析的优缺点？ 答：优点：设备简单、操作方便、样品回收率高、实验重复性好、不改变样品生物学活性。 缺点：分辨率较低，尤其是相对分子质量相近的分子之间。 第三章 动物细胞工程制药 贴壁培养大多数哺乳动物细胞的培养必须采用这种方法。 悬浮培养 转化细胞系：失去了正常