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烟草磷酸吡哆醛水解酶的分离纯化与表征
目录
摘要………………………………………………………………………………………………………………………．I
Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．…．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．…．．．．．．．．II
1 文献综述………………………………………………………………………………．1
1．1维生素B6(VitaminB6，VB6)简介…………………………………………………1
1．2 VB6的生物合成途径………………………………………………………………2
1．3磷酸酶的概述……………………………………………………………………．．4
：!i；i言……．……………………………………………………．……………………．………………………．……．．6
2．1 课题研究的目的和意义…………………………………………………………一6
2．2研究内容…………………………………………………………………………．．6
2．3课题来源…………………………………………………………………………一6
3材料与方法……………………………………………………………………………．7
3．1 材料、仪器和试剂………………………………………………………………一7
3．1．1 材粒l……………………………………………………………………………………………………．．7
3．1．2主要仪器和设备………………………………………………………………7
3．1．3主要试剂………………………………………………………………………7
3．2实验方法…………………………………………………………………………一7
3．2．1 PLP水解酶酸碱性的测定……………………………………………………7
3．2．2 PLP水解酶的分离纯化………………………………………………………7
3．2．3 PLP水解酶酶活性的测定……………………………………………………8
3．2．4蛋白质浓度figS,0定……………………………………………………………9
3．2．5 PLP水解酶纯度和分子量测定……………………………………………．．10
3．2．6 PLP水解酶部分酶学性质的测定…………………………………………．．11
IV
3．2．6．1 酶的最适温度和温度稳定性……………………………………．11
3．2．6．2酶的最适pH和pH稳定性………………………………………11
3．2．6．3酶促反应时间……………………………………………………．11
3．2．6．4米氏常数Km的测定……………………………………………．11
3．2．7化学试剂对酶活性的影响…………………………………………………．．12
3．2．7．1 金属离子对酶活性的影响………………………………………．12
3．2．7．2不同化合物对酶活性的影响……………………………………．13
4结果与分析……………………………………………………………………………14
4．】PLP水解酶酸碱性的测定………………………………………………………．14
4．2 PLP水解酶的分离纯化…………………………………………………………．15
4．3 分子量的测定……………………………………………………………………17
4．4 PLP水解酶的部分酶学性质研究………………………………………………．18
4．4．1 酶促反应的最适温度和温度稳定性………………………………………．．18
8
4．4．2酶促反应的最适pH和pH稳定性…………………………………………1
4．4．3酶促反应时间………………………………………………………………．．18
4．4．4米氏常数Km的测定………………………………………………………一20
4．5化学试剂对酶活性的影响………………………………………………………22
4．
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