出口食品小肠结肠炎耶尔森 SN 0174-92氏菌检验方法.docVIP

出口食品小肠结肠炎耶尔森 SN 0174-92氏菌检验方法 　　中华人民共和国进出口商品检验行业标准 　　出口食品小肠结肠炎耶尔森SN0174-92氏菌检验方法 　　代替ZBX04003-86 　　MethodfordetectionofYersiniaenterocciiticainfoodforexport 　　1　主题内容与适用范围 　　本标准规定了出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中小肠结肠炎耶尔森氏菌(以下简称耶氏菌)检验方法。 　　本标准适用于出口冷冻和生鲜的猪肉、猪舌、鸡肉、虾和虾仁中耶氏菌检验。其他食品可参照使用。 　　2　样品制备及增菌培养 　　　如为冷冻食品,应于2～5下不超过18h解冻。若不能及时检验,应放于-15保存,最多不能超过2d。非冷冻易腐的食品应置于4冰箱保存,最多不得超过3d。 　　　无菌操作称取剪碎后的样品25g(猪舌应剪取舌根、舌两侧及舌尖部肉),置于装有225mL改良的磷酸盐缓冲液的500mL广口玻璃瓶中,充分振荡(若采用均质,可将剪碎后的样品25g置于灭菌均质杯内,加入25mL已灭菌的改良磷酸盐缓冲液,以8000～10000r/min均质,再将均质好的样品置入装有200mL改良的磷酸盐缓冲液的500mL广口玻璃瓶中,充分振荡),然后于25培养48±2h。吸取该培养液1mL移种于预先预热到25的装有9mL的5g/L氢氧化钾溶液的试管中,使之充分混合。立即吸取该混合液2mL移种于预先预热到25的装有8mL的改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤的试管中,充分混合,于25培养4～6h。 　　3　分离培养 　　　将上述经改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤增菌的培养液摇匀,以直径3mm的接种环分别挑取一环划线于表面无凝固水的含吐温80的亚硫酸铋琼脂平板和含吐温80的麦康凯琼脂平板各一个,培养于25,含吐温80的亚硫酸铋琼脂平板培养3～4d,含吐温80的麦康凯琼脂平板培养48±2h。 　　　观察各琼脂平板,有无典型或可疑耶氏菌菌落。 　　耶氏菌的菌落特征见表1：表1　小肠结肠炎耶尔森氏菌菌落特征 　　平板琼脂菌落类别菌落特征 　　大小,mm表面透明度高度颜色边缘形状 　　含吐 　　温80 　　的麦 　　康凯 　　琼脂A1～粗糙,有多层环状皱折不透明枕状,中心呈乳头状凸起淡粉红色,菌落周围绕有毛玻璃样淡粉红色晕不整齐圆形 　　B1～光滑、湿润半透明扁平落淡粉红色,菌周围绕有毛玻璃样淡粉红色晕整齐圆形 　　C1～光滑、湿润半透明扁平淡橙粉红色散射状皱折有细微圆形 　　D1～粗糙,有多层环状皱折不透明枕状、中心呈乳头状凸起淡粉红色,菌落周围培养基为透明淡蔷薇红色不整齐圆形 　　含吐 　　温80 　　的亚 　　硫酸 　　铋琼 　　脂E针尖～光滑不透明扁平或凸起菌落黑绿色或黑灰色至漆黑色,周围培养基有时有黑绿色微粒弥漫整齐圆形 　　F2～3粗糙,有多层环状皱折不透明扁平,有时中心呈乳头状凸起灰绿色,菌落周围绕有浅灰绿色或蓝绿色毛玻璃样晕不整齐圆形 　　4鉴定 　　筛选试验 　　　每种琼脂平板至少应挑取两个典型或可疑菌落,分别用光滑的接种针穿刺并密布地接种于改良的克氏双糖铁琼脂各一管,于25培养24±2h。 　　4.　挑取菌落后的琼脂平板,应置于5～8至少保留24h,以备必要时复查。 　　　按表2试验结果进行判断。 　　表2　改良的克氏双糖铁琼脂筛选小肠结肠炎耶尔森氏菌 　　改良的克氏双糖铁琼脂初步判断 　　斜面底层产气硫化氢 　　AA－(＋)－可疑小肠结肠炎耶尔森氏菌 　　AA＋＋非小肠结肠炎耶尔森氏菌 　　AA＋- 　　KA＋＋ 　　KA－－ 　　注：K产碱,A产酸；＋阳性反应；－阴性反应；(＋)偶见少量小气泡。 　　　生化试验 　　　刮取一满环(直径3mm)符合表2的典型或可疑耶氏菌特性的改良克氏双糖铁琼脂斜面培养物,接种于装有1mLRustigian氏尿素培养基(改良法)的10mm×100mm的试管中,手摇或于电动快速混合器上振摇5～6s,然后于25培养,每隔半小时观察一次,培养观察至4h。 　　　将尿素酶试验阳性的改良克氏双糖铁琼脂斜面培养物按表3所列生化项目(尿素酶试验除外)进行生化试验,培养于25,氨基酸脱羧酶试验培养24～30h,其他生化试验阴性结果的应培养观察4d。　 　　　表3　小肠结肠炎耶尔森氏菌生化反应与血清学试验结果判定 　　生化反应血清学试验结果判定 　　尿素酶试验鸟氨酸脱羧酶试验赖氨酸脱羧酶试验蔗糖试验山梨醇试验L-阿拉伯糖试验鼠李糖试验西蒙氏枸橼酸盐试验 　　＋＋－＋＋＋－－”O”因子血清试验阳性小肠结肠炎耶尔森氏菌(典型) 　　＋＋－－＋＋－－”O”因子血清试验阳性 　　＋-－--＋--”O”因子血清试验阳性小肠结肠炎耶 　　＋＋-＋＋＋＋+”O”因子血清试验阳性尔森氏菌(非典型)