第12 高效液相色谱法1.ppt

高效液相色谱法 (high performance liquid chromatograph------HPLC) 概 述 第1节 高效液相色谱仪 第2节 基本理论 第3节 各类高效液相色谱法 第4节 改善分离度的方法 第5节 分析方法 第6节 发展趋势 概 述 一.定义 二. HPLC诞生 三. LC 的进展 四.特点 五. HPLC与GC的比较 六. HPLC与经典LC的比较 一.定 义： 以经典LC为基础，引入GC的理论与技术，并加以改进而发展起来的一种分离分析方法。 二.高效液相色谱的诞生 到六十年代早期，Giddings 将气相色谱的重要理论用于液相色谱，同时出现了高效能液相色谱填料。 从 1967 ~ 1969 年，Kirkland,  Huber, Horvath, Preiss 和 Lipsky 等研制了高效液相色谱仪。 从此液相色谱的分离效率和速度大大提高，达到可以和气相色谱相媲美的程度。 三. 进 展 1. 无进展期（50年代） 2. 新生时期（60至70年代） 3. 黄金时代（70年代至今） 发展趋势： 色谱仪人工智能化及联用技术 三.特点 三高、两广、一少 高效化、高速化、高灵敏度 分析范围广、流动相选择范围广 样品用量少 色谱柱可反复使用、流出组分易 收集、安全 四.HPLC与GC的比较 相同点 分离效能高 灵敏度高 分析速度快 不同点 HPLC GC 分析对象 80%化合物 20%的气体和 有机物、无机物 低沸点化合物 样品要求 溶 液 能够汽化 流动相 与组分有作用 载气化学惰性 柱 温 低温或常温 高 温 流动相输送 高压泵 高压瓶 HPLC GC 流动相性质 液 体 气 体 不可压缩 可压缩 压力测试 压力传感器 压力表 进样位置 进样器 柱 头 柱形 直 形 Ｕ型 、螺旋型 柱长 10-25cm 1m,2-100m 五. HPLC与经典LC的比较 相同点：均有四种色谱机理 液固吸附色谱 (HPLSC) 液液分配色谱 (HPLLC) 离子交换色谱 (HPIEC) 凝胶色谱 (HPGPC) 不同点: LC HPLC 固定相 全多孔 表面多孔型的 无定型 全多孔微粒 粒度 不均匀不耐高压 均匀耐高压 操作压力 常压、低压 高压 柱 效 10-100/m 104 -106 /m 柱 长 1-2m 10-25cm 柱内径 2-5cm 0.2- 0.5cm 不同点: LC HPLC 样品用量 1-10g 10-6 - 10-2g 分析时间 长 1-20h 10-几十min 装置 间 断 连续、自动化 非仪器 仪器化 精度低 精度高 第1节 HPLC色谱仪 一.HPLC仪流程 二.主要部件 一. HPLC仪流程 高压输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 数据处理系统 HPLC 的组成及工作流程 1螺旋注射泵2往复柱塞泵3往复隔膜泵4气动放大泵 二.主要部件 (一)输液泵 (二)进样器 (三)色谱柱 (四)检测