实验26_色素原底物反应测定酶活性课件.ppt

三、血清淀粉酶（AMS）测定 实验原理 试剂及器材 1. 磷酸缓冲液（pH7.10） 2. 34 KU/L α- 葡萄糖苷酶溶液 。 3. 57.5mmol/L底物溶液。 操作步骤 1. 吸取α-葡萄糖苷酶溶液400μl，样品20μl，预温至37℃，再吸入底物溶液40μl，启动半自动生化分析仪监测。 2. 主要参数 温度 37℃；延滞时间3min；波长 405nm间隔时间 30s；监测时间 3min 。 计算 Vt为反应总体积（ml）； Vs为样品用量（ml）； L为比色皿光径（cm）； 3为由产生4NP的mol数换算成被水解底物4NP-G7的μmol数； E405nm为4NP的摩尔消光系数（37℃、30℃和25℃时分别为 10 600、9 500和9 000） 参考范围 血清淀粉酶（37℃）：≤220U/L 临床意义 1. 急性胰腺炎发病后8~12小时血清AMS开始升高，12~24小时达高峰。2~5天下降至正常，若超过500U即有诊断意义，达350U时应怀疑该病。 2. 尿AMS约于发病后12~24小时开始升高，下降也较血清AMS慢，所以在急性胰腺炎后期测定尿AMS更有价值。 3. 流行性腮腺炎，特别是胰腺炎时，血和尿中的AMS显著升高。 4. 正常血清中的AMS主要由肝脏产生，故肝病时血清及尿中AMS可同时减低。 注意事项 1.Tris缓冲液抑制α-葡萄糖苷酶，EDTA严重干扰测定，其它抗凝剂无明显影响。 2. 血清淀粉酶十分稳定，置室温1周或冰箱2个月，酶活性没有明显变化。 3.尿液呈酸性时，淀粉酶稳定性较差，因此尿液标本保存前，须将pH调节至7.0左右。 评价 本法线性范围可达2 000U/L，方法简便快速，精密度好，既适合自动化分析，也可手工测定，结果能以国际单位表示，是目前测定淀粉酶较为理想的方法 。 思考题 1. 简述测定GGT的基本原理？ 2. 简述测定血清GGT的临床意义。 3. ALP测定采用色素原底物法应注意哪些事 项？ 4. ALP测定还有哪些方法？ 5. 测定血清淀粉酶有哪些方法？ 6. 血清淀粉酶测定的临床意义？ 返回本实验目录 * * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验26 色素原底物反应测定酶活性 * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验26 色素原底物反应测定GGT * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验26 色素原底物反应测定ALP * 全国高等医药院校医学检验专业规划教材 临床生物化学检验实验指导 （第二版） 实验26 色素原底物反应测定AMS 贵阳医学院医学检验系　黄海 实验 26 色素原底物反应测定酶活性 实验目的 掌握：色素原底物反应测定酶活性的原理。 熟悉：熟悉连续监测法测定实验的操作步骤。 了解：测定GGT、ALP和AMS的临床意义。 一、血清γ-谷氨酰基转移酶（GGT）测定 二、血清碱性磷酸酶（ALP）测定 三、血清淀粉酶（AMS）测定 实验原理 （黄色化合物，λ=405nm） 在405~410nm处监测吸光度变化。吸光度增高速率（ΔA/min）与GGT活性呈正比，利用连续监测法酶活性的计算公式，求出GGT活性。 一、血清γ-谷氨酰基转移酶（GGT）测定 试剂与器材 底物缓冲液 Tris-HCl缓冲液110mmol/L；双甘肽110mmol/L；L-谷氨酰-3-羧基-4-硝基苯胺6.0mmol/L；pH(37℃) 7.7。 2. 待测标本 病人血清或质控血清。 操作步骤 1. 手工操作 （1）37℃预温的底物缓冲液。 （2）在光径为1.0cm石英比色皿中加入血清100μl及预温的底物缓冲液1 000μl；在37℃，波长405nm连续监测60s吸光度的变化，求出ΔA/min。 操作步骤 2. 自动化生化分析仪操作程序的设置 按手工操作要求设置参数为： F值: 1 159； 延滞期时间: 30s； 连续监测时间: 60s； 比色皿光径: 1.0cm； 波长: 405nm； 吸样量: 100μl； 温度: 37℃ 计算 式中9 490为2-硝基-5-氨基苯甲酸在405nm处的摩尔消光系数。 参考范围 男性血清GGT: 11 U/L ~50U/L （3