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银杏叶发酵与未发酵提取物抑菌活性研究 　　[摘要] 目的 对比银杏叶发酵与未发酵萃取物提取物的抑菌活性。 方法 利用冠突散囊菌在银杏叶培养基中发酵培养，将得到的发酵液以及未发酵的银杏叶水提物依次进行石油醚、乙酸乙酯的萃取，选取各部位提取物进行对指示菌种（枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽孢杆菌）进行药敏纸片法抑菌试验。选取未发酵部分乙酸乙酯提取物进行最小抑菌浓度的测定。 结果 银杏叶未发酵乙酸乙酯提取物对供试菌的抑制作用较显著，而且抑菌活性与样品浓度不成正相关。未发酵乙酸乙酯提取物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为：2.5、2.5、5.0、10.0 g/mL。 结论 银杏叶发酵与未发酵的乙酸乙酯提取物对枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌和大肠杆菌均有一定的抑制作用，而未发酵作用较明显。石油醚提取物在发酵前后抑菌活性变化不大。说明银杏叶中主要的抑菌成分存在于乙酸乙酯极性段，发酵过程中，由于微生物转化，造成银杏叶中抑菌活性成分减少。 　　[关键词] 银杏叶；冠突散囊菌；发酵；抑菌；乙酸乙酯提取物 　　[中图分类号] R285 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）12（b）-0130-04 　　冠突散囊菌，又称“金花”菌，是茯砖茶的优势菌种。茯砖茶通过冠突散囊菌的代谢等作用，茶叶发生深度的良性生理生化变化，滋味更醇厚，茶香更纯正。同时在“金花”菌的作用下，茯砖茶具有消食健胃以及降脂的功效[1-2]。 　　银杏又名白果，属我国特产植物资源，其产量占世界总量的70%以上。银杏和银杏叶的提取物（Ginkgo biloba extract，GBE）因含有黄酮类、内酯类、酚类等多种活性成分而具有重要的药用价值。GBE的抑菌活性与其含有的黄酮类的活性成分有关[3]。武雪芬等[4]通过实验发现植物浓缩液乙酸乙酯层含有大量的黄酮类成分，因此本实验通过与石油醚提取物的对比，考察发酵与未发酵乙酸乙酯提取物的抑菌活性。 　　1 仪器与试药 　　1.1 药材 　　银杏叶Ginkgo biloba采于2012年10月清华大学校园，50℃烘干，至干燥通风处保存。 　　1.2 试剂、菌株及设备 　　马铃薯琼脂培养基（PDA）（北京奥博星生物技术有限公司）；琼脂（北京拜尔迪生物有限公司）；酵母膏、牛肉膏（北京奥博星生物有限公司）；链霉素（意大利Inalco公司）；二甲基亚砜（DMSO）（北京Biodee生物技术有限公司）冠突散囊菌（eurotium cristatum）、枯草芽孢杆菌（bacillus subtilis）、金黄色葡萄球菌（staphylococcus aureus）、大肠杆菌（escherichia coli）、蜡样芽孢杆菌（bacillus cereus）购自中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC），其余试剂均为分析纯，购自北京化工厂。 　　FW100型粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；旋蒸仪（日本EYELA公司）；SVE-4A1型垂直流超净工作台（新加坡ESCO公司）；AL204-IC型电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；THZ-D型台式恒温振荡器（苏州培英实验设备有限公司）；SHZ-CB型循环水式真空泵（巩义市英峪予华仪器厂）；pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；恒温培养箱（德国MMM Incucell系列）；微量移液器（美国Thermo公司）。 　　2 方法与结果 　　2.1 冠突散囊菌悬液的制备 　　在PDA平板培养基上培养冠突散囊菌，待4 d后平板长满菌落，在无菌条件下，加无菌水5 mL于平板上，用接种环将黄色闭囊壳刮下，悬浮于无菌水中，再将悬浮液倒入带有玻璃珠和95 mL的三角瓶内，150 r/min振摇20 min，制成均匀的孢子悬液。调整孢子浓度为5.0×108～6.0×108 cfu/mL。 　　2.2 银杏叶培养基的制备 　　参照GB8305-87茶水浸出物标准[5]，将银杏叶打成细粉，过60目筛。称取8.0 g银杏叶粉末试样于1 L沸蒸馏水中，浸提45 min（每隔10 min摇动1次），立即减压过滤，残渣用少量蒸馏水洗2～3次，合并滤液于2 L容量瓶，冷却后用蒸馏水定容至刻度。以邓放明[6]筛选的最优培养基配方作为参考，确定培养基成分为：含0.8%（m：V）银杏叶的浸提液加6%（m∶V）的蔗糖，pH=5.5。配制好的培养基在121℃下高压蒸汽灭菌20 min。 　　2.3 接种与发酵培养 　　将制备好的孢子悬液在无菌条件下接种到培养基中，使得接种量为5%（V∶V）。以邓放明[6]筛选的最优培养基配方作为参考，发酵条件为30℃，120 r/min条件下培养7 d。 　　2