青藤碱给药后家兔血液及关节液中药物浓度变化关系.docVIP

青藤碱给药后家兔血液及关节液中药物浓度变化关系 　　[摘要] 目的 利用微透析技术考察青藤碱给药后家兔血液及关节液中药物浓度变化的关系。 方法 将微透析探针植入家兔血液及膝关节液中，家兔灌胃给药或膝关节处经皮给药或腹部经皮给药50 mg/kg后，收集家兔血液及关节液中的微透析样品，采用HPLC-MS法测定微透析样品中青藤碱的浓度，观察家兔血液及关节液中青藤碱浓度变化的规律。 结果 不同的给药途径，不同的给药部位，血液和关节液中的青藤碱浓度变化的趋势是相似的，但灌胃给药和腹部经皮给药，血液和关节液中的青藤碱浓度差异有统计学意义（P 0.05）。 结论 青藤碱给药后血液和关节液中的药物浓度变化趋势是相似的，但浓度高低与给药途径及给药部位有关。 　　[关键词] 青藤碱；微透析；血液；关节液；高效液相色谱-质谱 　　[中图分类号] R285.5 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2013）08（c）-0023-03 　　青藤碱（sinomenine）是中药青风藤中的生物碱单体，是青风藤抗炎、镇痛、抗风湿作用的主要有效成分。临床研究证明，青藤碱对治疗类风湿性关节炎有较好疗效[1]。目前研究治疗关节炎类药物在体内的浓度变化一般是采取全血，测定血液中的药物浓度，或者是抽取关节液进行药物浓度的分析，从而了解关节液中的药物浓度的变化[2]，而血液和关节液中的药物浓度变化之间有何种关系一直存在疑问。微透析技术是一种新型的活体细胞外液生物采样技术，具有独特的微创性和采样的连续性。体内外的实验研究表明，青藤碱符合微透析采样的条件，且已经实现了皮肤局部青藤碱含量的动态测定[3-5]。 　　本文建立了家兔膝关节腔微透析探针的植入方法，并以青藤碱为研究药物，利用微透析技术同步进行青藤碱不同途径、不同部位给药后家兔血液及关节液中的采样，并采用HPLC-MS测定微透析液中的青藤碱浓度，考察血液及关节液中药物浓度变化的关系，为临床研究中青藤碱制剂合理的给药方式提供理论依据。 　　1 仪器与材料 　　1.1 仪器 　　美国BAS公司微透析系统（MD1000流速控制器、MD1001灌注器推进泵、MD0100灌注器、MD1002灌注器支架）；关节用微透析探针（CMA/12，瑞士CMA公司??PC材料，活性透析膜长度为4 mm，分子截留值为20k dalton）；血液用微透析探针（CMA/20，瑞士CMA公司，PC材料，活性透析膜长度为10 mm，分子截留值为20k dalton）。 　　TSQ Quantum ACCESS 型液相质谱联用仪；Xcalibur 2.0数据处理系统、Surveyor自动进样器（美国Thermo公司）；X-射线拍摄仪（德国西门子公司，由广东省中医院放射科提供）；Milli-Q级纯水机（美国synthesis公司）；电子天平XR205SM-DR（瑞士precisa公司）。 　　1.2 药品与试剂 　　1.2.1 对照品 青藤碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0774-200105）。 　　1.2.2 供试品 青藤碱凝胶剂（自制）；青藤碱粉末（购于宝鸡市荣德生物工程有限责任公司，提纯后纯度为94%）。 　　1.2.3 试剂 甲醇（色谱纯，美国merck公司）；甲酸（色谱纯，美国Sigma公司）；肝素钠（上海蓝季科技发展有限公司）；NaCl、KCl、无水CaCl2均为国内分析纯。 　　1.3 实验动物 　　健康新西兰兔9只，雌雄各半，体重2.0～2.5 kg，由广州中医药大学实验动物中心提供（合格证号：SCXK粤2003-0001，粤监证字2007A016）。 　　2 方法 　　2.1 液相色谱-质谱条件[6] 　　色谱条件：色谱柱为Hypersil GOLD C18柱（150 mm×2.1 mm，3 μm）；流动相为甲醇-0.1%甲酸（30∶70）；流速：0.2 mL/min；柱温25℃；进样量10 μL。 　　质谱条件：正离子选择反应监测（SRM）；大气压电喷雾离子源（ESI源）；毛细管温度为350℃；喷雾电压为3.5 kV；辅助气流速5 arb；鞘气压力25 kPa；用于定量分析的子离子为m/z239和m/z181，碰撞能量分别为25 Hz和34 Hz。 　　2.2 动物实验方法 　　2.2.1 探针植入方法的建立 将家兔耳缘静脉注射20%乌拉坦麻醉后，固定在解剖台上，腹股沟处皮下注射5000单位肝素钠，20 min后将CMA/20微透析探针植入家兔耳缘静脉中，用医用胶布固定[7]。用一根普通注射器的注射针头从髌韧带两侧凹陷处斜向下45°刺入后拔出，将CMA/12探针引导导管从针孔处沿着同一角度旋转着刺入，上下移动导管，确定没有阻力后拔出引导导管中的金属杆，将探针小心地