蓝白斑试验课件.ppt

* 原核生物表达体系： 大肠杆菌、枯草杆菌、农杆菌 大肠杆菌表达体系的优点： 积累了充足经验，有数不清的载体可供应用； 可因不同载体而选择不同菌种作宿主； 操作安全，致病能力低 ； 成本相对低得多 ； 真核生物的基因先在原核体系上构建克隆，称为亚克隆（subclone），然后采用其它方式转移至真核细胞上表达。 缺点： 原核生物载体构建的重组体是无法进入动物细胞进行表达； 没有加工所需的酶系统； 热源、内毒素不易除去 ； 常会形成包涵体。 ? 表达体系的发展 ? 表达体 载体 宿主 第一代 原核生物表达体系 质粒、噬菌体 细菌 第二代 酵母表达体系 穿梭质粒 酵母 第三代 哺乳类细胞表达体系 病毒、脂质体 培养细胞 第四代 基因直接导入 DNA本身 生殖细胞、 体细胞、个体 乳糖操纵子的天然诱导物是乳糖 乳糖类似物异丙基-β-D -硫代半乳糖苷（IPTG） 有更强的诱导作用。 IPTG配合使用在基因工程可作蓝白斑筛选。 LacZ基因编码的乳糖苷酶 X-gal 蓝色吲哚产物 三、蓝白斑试验（IPTG-Xgal 试验） 诱导物 Z Y X P O Z Y X P O 乳糖 *