重组乙型肝炎疫苗 ppt课件.pptVIP

——动物细胞工程制药 制作者：黄玉玲 背景 乙型肝炎是由病毒引起的，约占所有病毒性肝炎的40﹪，它可以急性发病，也可以形成慢性肝炎，并进而引发肝硬化，肝癌，而其中很大一部分人可以是健康的病毒携带者，不出现症状，但表面抗原（HbsAg）阳性，或者同e抗原（HbeAg）阳性，常常是重要的传染源。在我国，人口众多，而这样的慢性病毒携带者约有一亿人，是对公共卫生的一个重要威胁。 乙肝病毒属DNA病毒科，有三种外壳的基因编码。乙肝病毒具有五种抗原抗体系统：即表面抗原抗体(HBsAg与抗-HBs)、e抗原抗体(HBeAg与抗-HBe)、核心抗原抗体(HBcAg与抗-HBc)、x抗原抗体(HBxAg与抗-HBx)和HBv-DNA。有临床意义的主要有HBsAg与抗-HBs、HBeAg与抗-HBe和抗-HBc，简称“两对半”。 　　临床主要表现为食欲减退、恶心、厌油、乏力、巩膜黄染、黄色尿、肝脏肿大、肝区痛等。 简介 重组乙型肝炎疫苗是由重组酵母或重组CHO工程细胞表达的乙型肝炎表面抗原，经纯化、灭活及加入佐剂吸附制成。前者为重组酵母乙型肝炎疫苗，后者为重组CHO乙型肝炎疫苗。其性状为白色混悬液，静置形成可摇散的沉淀。 疫苗用法 (2)注射部位为上臂三角肌肌内。 (1)本疫苗注射时要充分摇匀。 (3)新生儿第1针在出生后24小时内注射，1个月及6个月后注射第2、3针;其他人群免疫程序为第0、1、6个月，剂量均为5ug/支。 疫苗制备 取国家批准的重组酵母乙型肝炎疫苗的原始菌种，经一代扩增，制成生产菌种，逐级扩增后接种于发酵罐，在适宜温度和时间内进行三级发酵，收集细胞，经破碎，吸附粗提，疏水色谱法精提乙型肝炎表面抗原，再经硫氰酸盐处理，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加入硫柳汞作为防腐剂。 取国家批准的重组CHO乙型肝炎疫苗的细胞株，用静置培养或旋转法培养细胞，当乙型肝炎表面抗原的分泌量达到每1.0mg/L时，收获培养液，经硫酸铵盐析，2～3次密度梯度离心和色谱法纯化后，再经浓缩，除菌滤过，甲醛灭活，氢氧化铝吸附等，加硫柳汞作为防腐剂，分装制成。 鉴别与检查 【鉴别 】 取本品，照《中国生物制品规程》酶联免疫吸附法，与已知乙型肝炎表面抗体确证其为乙型肝炎表面抗原。 【检查】照《中国生物制品规程》规定的方法检查如下项目。 　　纯度 不得低于98%。 　　氢氧化铝 每1ml不得过1mg。 　　硫柳汞 不得过0.01%。 　　甲醛 不得过0.01%。 　　异常毒性 取本品，依法检查，应符合规定。 　　热原 取本品，依法检查，应符合规定。 　　无菌 取本品，用直接接种法检查，应符合规定。 【效价测定】取本品，照《中国生物制品规程》测定，应符合规定。 　　酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得过1.5μg。体外相对效力试验抗原含量与参比苗的抗原比值不低于0.5。 　　CHO乙型肝炎疫苗的ED50与参比苗的ED50比值不低于1.0。 　　【类别】亚单位疫苗。 　　【规格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5μg 　　CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10μg 　　【贮藏与效期】在2～8℃的暗处保存。有效期2年。 重组乙型肝炎疫苗的种类及生产现状 血源乙肝疫苗经过十年上亿人份人群接种，证明具有良好的安全性的免疫原性，但存在对生产者和献血者健康有潜在危险性，生产成本高等缺陷，我国已经完成同重组乙肝疫苗对血源疫苗的替代工作。 　　目前重组乙肝疫苗主要分为酵母，（酿酒酵母和甲基营养型酵母）以及中国仓鼠卵巢细胞（Chinese Hamster Ovary cell,CHO）表达疫苗。 （一）酿酒酵母 1982年Valenzuela首先在酿酒酵母中成功表达乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美国默克公司的重级酵母乙肝疫苗首次取得专利并得到美国FDA的批准。1989年7月比利时史克比成公司的另一重组酵母乙肝炎疫苗也取得专利。目前重组酵母乙肝疫苗的生产厂家除默克公司，史克公司外，我国北京天坛生物，深圳康泰公司也大量生产该种疫苗。其优点为：酵母为低等真核微生物，易于在营养成份简单的培养基中高密中发酵培养，利用工业化生产，表达量高，目前世界上大规模生产和上市的疫苗大多数由该表达系统制备而成。 （二） 甲基营养型酵母 共有4种表达系统。甲基营养型酵母生产HbsAg具有培养基廉价，目的基因与酵母染色整合的优点， 不仅可克服质粒丢失，还可提高表达量。汉逊酵母（Hansenula Polymorpha，H.P.）和毕赤酵母（Pichia Pastoris，P.P.）系统已应用于工业化生产。已上市的酿酒酵母和甲基营养型酵