《基础生物学实验》精品课程 实验八 赤霉素对α-淀粉酶的诱导....ppt

实验八 赤霉素对α-淀粉酶的诱导形成 ;一、实验目的 1、通过实验深入了解赤霉素在种子萌发过程中的调控作用。 2、掌握测定α-淀粉酶活性的一种简便方法。;;二、实验材料、试剂与仪器设备 （一）实验材料 大麦（或小麦）种子。 （二）试剂 1、1％次氯酸钠溶液。 2、0.1%淀粉溶液：取1g淀粉和8.16g KH2PO4，用蒸馏水配制成1000mL溶液。 3、2×10-5mol/L赤霉素溶液：称取GA3 6.8mg放入烧杯中，加少量95%酒精使其溶解，移入1000mL容量瓶中，加水定容至刻度。然后再稀释成2×10-6mol/L、2×10-7mol/L和2×10-8mol/L三种浓度的赤霉素溶液。;;三、操作步骤 1、取样 选取大小一致、完好的大麦或小麦种子50粒，用刀片将每粒种子横切成有胚和无胚的半粒，分装于2个烧杯中。 2、表面消毒 向2个烧杯中加入1％次氯酸钠溶液，以浸没种子为度。消毒 15min后，用无菌水冲洗3次，备用。 ;3、处理浓度 将6只青霉素小瓶编号后，按表40-1加入溶液和材料。溶液混匀后，1～6号小瓶中赤霉素的最终浓度分别为：0、0、2×10-5、2×10-6、2×10-7和2×10-8mol/L。将青霉素小瓶置于恒温振荡器中于25℃下振荡培养24h。 ;青霉素小瓶编号;4. 淀粉酶活力分析 　　培养完毕后，从每个小瓶中吸取0.1mL溶液，分别加到事先盛有1.9mL 0.1％淀粉溶液的试管中，摇匀，在30℃恒温水浴锅中保温5min后，用滴管各取出1滴反应液于白瓷板的6个穴中，滴加1滴I2-KI，观察显色情况，比较各穴中颜色的差异。若有显色差异，则取出试管各加I2 -KI溶液2mL和蒸馏水5mL，充分摇匀，于分光光度计上在580nm波长下，以蒸馏水作空白对照，测定各试管反应液的吸光值A，比较A值的差异。;　　若用白瓷板显色时差异尚不明显，则继续保温反应，直至在白瓷板上有显色差异为止。以A值从标准曲线上查得溶液中淀粉的含量，以被分解的淀粉含量衡量淀粉酶的活性。标准曲线可用不同浓度(0、20、40、60、80、100、150、200ug/mL)淀粉溶液与I2-KI显色反应后所测得的吸光值绘制。 ;;;六、作业 从各号瓶内分解淀粉的能力，分析不同浓的赤霉素对α-淀粉酶形成的诱导作用。