实验六 细菌的生理生化及肠杆菌科的鉴别课件.ppt

6、麦康凯琼脂平板(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) （乳糖、胆盐、指示剂：1%中性红） 方法：划线，分解乳糖 菌落变红色 7、三糖铁琼脂斜面(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) （葡萄糖、蔗糖、乳糖、硫酸亚铁铵、 指示剂：0.5%酚红） 方法：先划斜面再穿刺 肠杆菌科的生化试验 1、麦康凯琼脂平板 2、三糖铁琼脂斜面 3、糖分解试验 微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖等等 4、吲哚（靛基质）试验 5、甲基红（MR）试验 6、VP试验：葡萄糖蛋白胨水 7、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验 8、脲酶 9、硫化氢试验 10、运动力试验 将以上接好细菌的培养基置37℃培养箱培养。 经18—24h培养观察细菌生长情况。有一些生化管则需要在隔天加试剂后才能观察其颜色变化，然后做好实验结果记录。 实验五细菌的生化试验及肠杆菌科的鉴别 一、目的要求 掌握细菌鉴定中常用生理生化反应的原理、方法、结果判定． 熟悉大肠杆菌和沙门菌主要培养特性和常 规微生物学诊断方法． 二、实验材料 菌种：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌、巴氏杆菌 培养基：葡萄糖高层琼脂、普通琼脂斜面、水琼脂斜面、氧化-发酵培养基（小生化管）、普通平板、麦康凯平板、淀粉平板、三糖铁斜面、各类生化反应管等． 器械：砂轮、试管架、接种环、接种针、灭菌刻度吸管、胶头、灭菌液体石蜡、酒精灯、废报纸等． 三、实验内容 1、细菌对空气（氧气）的需要 菌种：大肠杆菌(液体)、枯草杆菌(液体) 培养基：葡萄糖高层琼脂（己溶化） 方法：用吸管将细菌各加入两支己溶化的葡萄糖高层琼脂管中，然后混合均匀。 2、细菌对营养的要求 菌种：大肠杆菌、巴氏杆菌 培养基：水琼脂斜面、普通琼脂斜面 方法：划线的方法 （一）细菌的生理生化试验 3、细菌氧化型与发酵型（O/F）的测定 菌种：大肠杆菌（液体）、枯草杆菌（液体） 培养基：加有葡萄糖和指示剂（1%溴麝香草酚蓝）的微型发酵管 方法：用接种针将两种菌各加入两支发酵管中，从不同菌里各取一管加入灭菌的液体石蜡，37 ℃正置培养。 产酸（浅绿色 黄色 ） 4、淀粉水解试验 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌 培养基：普通营养琼脂平板 方法：一块平板上划分3个区域，一区划大肠杆菌，二区划枯草杆菌，三区划金黄色葡萄球菌第二天长出菌后，在菌落上滴加碘液。 5、触酶（过氧化氢酶）试验 菌种：大肠杆菌、枯草杆菌、金黄色葡萄球菌、 培养基：普通营养琼脂平板 方法：一块平板上划分3个区域，一区划大肠杆菌，二区划枯草杆菌，三区划金黄色葡萄球菌第二天长出菌后，在菌落上滴加H2O2 10、甲基红（MR）试验(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：葡萄糖蛋白胨水 原理：甲基红试验： 分解葡萄糖产生丙酮酸，进一步分解为甲酸、乙酸、乳酸等使pH下降，含甲基红指示剂的培养基变红 11、VP试验：葡萄糖蛋白胨水(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 原理：某些菌发酵葡萄糖产生丙酮酸，丙酮酸经多脱羧、氧化等反应生成二乙酰，其与蛋白胨中精氨酸胍基作用产生粉红色化合物 8、糖分解试验(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 微量发酵管：葡萄糖、乳糖、甘露醇、蔗糖 方法：用接种针挑取菌种后接入发酵管内，用报纸包好口，置培养箱培养。发酵糖产酸：指示剂溴甲酚蓝由紫色 黄色 9、吲哚（靛基质）试验(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：蛋白胨水微量管 原理：细菌分解蛋白质中的色氨酸产生吲哚，吲哚与对位二甲基氨基苯甲醛作用形成玫瑰吲哚而成红色。 方法：接种针接种，培养12-24 h后，加入试剂显色 12、枸橼酸盐（柠檬酸盐）利用试验 (菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：Simmon氏枸橼酸钠微量发酵管 原理：细菌若能以枸橼酸钠为唯一碳源，磷酸铵为唯一氮源，则可利用枸橼酸钠产生碳酸盐，与利用铵盐产生的NH3反应，形成NH4OH，使培养基变碱，pH升高，指示剂溴麝香草芬蓝由草绿色变为深蓝色。 13、脲酶(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：尿素微量发酵管（指示剂：酚红） 原理：细菌分解尿素产生2分子NH4，使pH升高，指示剂变红。 14、硫化氢试验(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：营养琼脂中含FeSO4的微量反应管 原理：凡细菌能分解含硫氨基酸，产生H2S者，其所产生的H2S会使培养基中的醋酸铅或FeCl3形成黑色的硫化铅或硫化铁。 15、运动力试验(菌种：大肠杆菌、沙门氏菌) 培养基：半固体琼脂微量反应管 方法：穿刺接种 （二）肠杆菌科的鉴别（大肠杆菌沙门菌）