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鸡白痢免疫血清制备 组员：凌豪 李昀哲 张万 石佑铭 尤智强 ppt制作：凌豪 实验目的和要求 了解影响机体免疫应答强度的因素; 明确初次应答和再次应答抗体产生的规律； 制备鸡白痢的抗血清； 熟悉佐剂的制备和动物免疫的常用方法； 了解抗体检测的常用方法。 在免疫学实验中,为制备抗体通常以抗原性物质给动物注射,经一定时间后,动物血清中可产生大量特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称免疫血清。 实验原理 免疫应答的影响因素 抗体的产生通常与抗原的质和量、动物种类以及接种的途径有密切关系。 一、抗原分子的结构和性质 1.分子量：分子量越大，免疫原性越强。 2.化学组成及结构 （1）蛋白质 （2）多糖：具有免疫原性, 较蛋白质弱。 （3）核酸：多无免疫原性。 3.结构的复杂性 4.分子构象 5.易接近性 6.物理状态 二、宿主方面的因素 1.遗传因素 同种动物不同品系及不同个体对同种抗原产生不同强度的免疫应答。 2.其他因素 年龄、性别与健康状态。 三、免疫原的剂量及进入途径 （1）剂量 1）剂量不足或过多均不引起免疫应答。 2）重复进入引起强免疫应答。 （2）途径：皮内、皮下、肌肉、静脉、腹腔、呼吸道和口服免疫应答水平依次降低。 抗体产生的一般规律 初次应答和再次应答规律。 抗体产生的顺序规律： IgM - IgG - IgA - IgD - IgE 初次应答和再次应答抗体产生比较 抗原抗体反应 抗原与抗体特异性结合，形成抗原抗体复合物。 物质基础: 1）抗原表位与抗体高变区间的互补结合 2）抗原表位与抗体高变区的沟槽分子表 面的结合 3）抗原抗体之间的结合力 4）亲水胶体转化为疏水胶体 抗原抗体反应的一般规律 特异性与交叉反应性； 可逆性：表面的结合，有可逆性； 抗原抗体交叉反应示意图 实验方案 免疫佐剂制备及动物初次免疫（第一周） 再次免疫及血清采集（第二周） 血清采集及抗体检测（第三周） W1 W2 W3 未免疫血清采集 再次免疫血清采集 初次免疫血清采集 初次免疫 再次免疫 实验材料 动物：家兔（每组一只） 抗原：鸡白痢沙门氏菌标准型C79—1菌株 佐剂：完全福氏佐剂。 其它： 普通琼脂培养皿、菌液标准比浊管、注射针筒、离心机、离心管、无菌三角烧瓶、恒温箱、冰箱、毛细管 琼脂培养液、酒精、0.01%硫柳汞 第一次实验步骤 1.免疫原制备 用鸡白痢沙门氏菌标准型C79-1菌株接种在普通琼脂培养基培养制备菌液，菌液经灭活，酒精沉淀处理，制成免疫原，按细菌标准比浊管确定免疫原的浓度。 2.动物免疫血清制备 将免疫原液与完全弗氏佐剂等量混和制成免疫抗原 每毫升含菌量为10亿,于兔背最长肌分两点注射。 每点注射0.5 毫升作为基础免疫, 以后每间隔6天耳静脉注射免疫原液一次, 剂量依次为15亿 30亿 60亿 120亿 150亿 第一次实验步骤 第二次实验步骤 3.血清提取 最后一次免疫7天后试血，效价达到预期要求，无菌采血 ，分离血清，分装与中性瓶，按血清量1/500cc加入硫柳汞防腐，4摄氏度保存。 Thanks!