植物组织养要点.docVIP

绪论 含义 一门以植物组织和细胞的离体操作为基础的实验性很强的新兴学科。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。可以生产有用的生物产品或培养有价值的植株，并可以产生新的物种或品系 植物组织培养的含义：通过细胞、组织、器官培养以及细胞融合等，达到改良品种、快速繁殖或生产生物产品的一种技术。 研究内容：①组培基本技术②细胞、组织、器官培养③原生质体培养④细胞融合及培养 2. 植物组织培养与生物技术的关系①植物组织培养是细胞工程的主要内容之一。 ②细胞工程是生物技术的主要内容之一。 ③生物技术又称生物工程，包括内容：细胞工程、基因工程、酶工程、发酵工程及生化工程。 ④生物技术又可分为：植物生物技术、动物生物技术、微生物生物技术。 发展历史：1.探索阶段 理论基础：细胞全能性学说的提出。2.奠基阶段 3.迅速发展阶段 应用 （一）、脱毒和快速繁殖（二）、育种 1.?利用培养变异，筛选优良突变体2利用远缘杂交幼胚培养，获得杂种植株，克服其杂交不亲和性。3.利用细胞融合技术，克服远缘杂交不亲和性。 （三）、离体种质保存随着地球不断开发、生态环境破坏，种质资源日趋枯竭，大量有用基因损失。利用组织培养法，超低温保存（-196℃）或试管保存，为保存和抢救濒临灭绝的生物带来希望。 （四）、细胞培养生产有用物质利用细胞培养生产次生物质，如药物、色素、食品添加剂、酶、农药等。 第一章实验室的设备及其基本操作技术 第一节??? 实验室的设备 一、准备室 功能：实验有关的准备工作，如器皿的洗涤；培养基配制、分装；培养基和器皿的高压灭菌；及培养材料的预处理等工作。 1．水槽 洗涤用 2．高压灭菌锅 培养基、工具等的灭菌 根据大小分为：小型、中型、大型 有全自动、手动之分。 3．干燥箱 器皿等烘干用 4．冰箱 存放培养基母液、酶、激素等用 5．酸度计（pH计、酸度测定仪） 6．天平 制作培养基用 粗天平（1/1000）：称量大量元素、蔗糖、琼脂等 精密天平（1/10000、1/100000）：称量微量元素、激素、酶等 7．玻璃器皿：三角瓶、试管、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管等 8．移液枪（根据条件） 其它：工作台、药品橱、锅、电炉、微波炉等 二、无菌操作室 功能：材料的离体无菌操作。 1．超净工作台：内设紫外灯、吹风装置、过滤装置 2．无菌操作用器具：刀、镊子、剪刀、酒精灯等。 3．医用小平车：推送、放置培养基用。 4．离心机：分离原生质体用 5．电融合仪：细胞融合用 三、培养室 功能：对离体材料进行控制条件下培养。条件：温度：25℃ 光照：光照时间和光照强度 1．培养架：放置培养物 2．空调机：调节温度 3．配电板：设熔电器和开关，用以管理室内的电源 4．时控器：自动关灯、开灯 5．温度自动纪录仪 四、细胞学观察设备 体胚形成、不定芽分化、细胞融合和原生质体培养的细胞分裂等的观察 实体显微镜（解剖镜） 倒置显微镜 生物显微镜 照相设备 以上是最基本的三个室，有条件可增加驯化室、温室等。 第 二 节 ?培养基及其配制 一、培养基的成分及作用 在离体条件下，植物组织良好的营养要求，随植物种类而变化。 培养基种类有很多（实验指导的后面附表），但一般可包括如下几部分： 1.无机营养成分 植物普遍需要若干矿物质元素和几种气体元素来维持生命活动。其中包括： 大量元素：氮、磷、钾、钙、镁、硫、铁以及来源于水中的氢、氧元素。 微量元素：硼、锰、锌、钼、铜、钴、氯等。 2、有机营养成分 大多数培养的组织细胞都能合成所有必需的维生素，只是数量上显然不足。为了能使组织很好地生长，在培养基中常常必须补加一种或一种以上维生素和氨基酸。其中有包括： ①维生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇(VB6)、烟酸(VB3)、泛酸钙(VB5)、钴胺素(VB12)、叶酸(VBc)、抗坏血酸(VC)等等。 因培养基种类不同，其种类和浓度不同。 ②氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、天门冬氨酸、天门冬酰胺、丙氨酸等等。因培养基种类不同，其种类和浓度不同。 ③肌醇：又称环己六醇，在糖类的互相转化中起作用。根据培养植物不同，是否添加。 腺嘌呤、硫酸盐：加入培养基时，可促进芽的形成和生长。根据培养基种类，是否添加。 ④其他复合成分：椰乳、酵母提取物、水解酪蛋白等。 3、 琼脂 固化剂，使培养基凝固。 4、 糖（蔗糖） 糖在培养基中的作用：1）.为细胞提供合成新物质的炭骨架。2）.为细胞的呼吸代谢提供底物与能源。3）.维持渗透压。 5、 植物生长调节物质 pH值：培养的植物材料大多数要求弱酸性的环境，一般将培养基调整至pH 5.6-5