274.土壤中分解纤维细菌的分离与性质鉴定.pptVIP

土壤中分解纤维细菌的分离与性质鉴定 指导教师： ） 引 言： 一、材料与方法 （一）实验主要材料： 1、杨凌地区六个不同点土样 2、增菌培养基（GN换用方）： 胰蛋白胨 葡萄糖 甘露醇 柠檬酸钠 磷酸氢二钾 氯化钠 蒸馏水 3、营养肉汤：蛋白胨 牛肉膏 氯化钠 蒸馏水 4、糖发酵培养基：蛋白胨 氯化钠 牛肉膏 琼脂溴甲酚紫 （在上述基础培养基中，加入所需糖类即可） 5、 赫奇逊培养基：KH2PO4 MgSO4·7H2O NaNO3 FeCl3 CaCl 琼脂 （二）实验设计 实验中通过优势择菌法从土壤样品中选择具有较强纤维素分解能力的优势菌，再进一步培养，经划线分离得到单个纯的菌后，对其进行进一步的生化鉴定如：革兰氏染色镜检、糖发酵的测定，三竣酸循环产物的测定等。将其初步归入特定菌属，最后经试纸崩解实验验证其分纤维素的分解能力，并与其它试验者的试验菌比较中间纤维素分解能力的强弱。 （三）测定方法 1、土样采集：分别在建筑工地、玉米秆堆下、玉米地、柏树林、烟草地、麦秸堆下六个不同地点以对角线三点取样法取样。 2、优势菌的选取：利用土粒法进行好气性纤维素分解菌的选取。 3、单个菌落的获得：从营养琼脂平板上将形态不一致的菌落再分别划线，直到菌落形态一致。 4、菌微生物学性质的测定 （1）形态描述 （2）革兰氏染色 （3）糖发酵试验：用灭菌过的注射器吸取2ml灭过菌的糖发酵液封端后，注入菌液，置于保温和相中培养，定期观察记录。 （4）脂肪酸的测定：取培养1d后的营养肉汤菌液，用气相色谱器检测脂肪酸含量。 5、纤维素分解能力的检测 （1）先将接种于营养肉汤复苏,然后用稀释培养法计数,接种1ml于含有1*4cm中速滤纸的10ml肉汤中28℃继续培养,每隔六小时继续观差滤纸得分解情况。 二、结果与分析 （一）培养2d后，不同土样中微生物对滤纸的分解强弱 土样分解程度（☆越多，分解越彻底） 从表中可以看出，秸杆地含好气相性纤维素分解菌较多，而建筑工地类含所需分解纤维较小的地方，几乎没有好气性纤维类分解菌。 （二）菌的微生物学特性 （3）代谢产物中脂肪酸的检测 4、滤纸崩解试验结果 讨论 本实验根据纤维分解菌对滤纸崩解的作用，利用土粒法从土壤中分离得到好气性纤维素分解菌，对其进行了一系列形态及生理生化特征的检测，初步确定是属于纤维粘菌属，并用气相色谱仪鉴定其代谢产物中高级脂肪酸的变化，表明此菌只产生极量的HFA 、分别为棕闾酸、油酸、亚油酸。最后通过滤纸崩解试验进一步验证并粗略比较该菌对纤维素的分解能力。 　致谢 ★感谢 老师对我的悉心指导 ★感谢搭档 的帮助 ★感谢各位老师的批评指正 * * 在自然界中存在着可以分解纤维素的微生物，它们包括：真菌、细菌、放线菌，研究纤维素生物转化具有重要意义我国是一个饲料资源十分紧缺的国家，通过微生物发酵充分利用农副产品下脚料、桔杆等提高饲料利用率，改善粗饲料的营养价值，降低成本，具有广阔的开发前景。此外，在生物制浆、处理造纸厂废水的环境污染，取新型能源方面，也有很高的价值，过去的几十年中在转化纤维素为饲料和酒精上做了很多工作，特别是近年来，人们利用热纤梭菌（clostridium ther mocellum）直接分解或与其它细菌共同培养分解纤维素产生酒精，进行了广泛研究，但对土壤中好气性纤维素分解菌的报道极少，在医疗，获取纤维素酶制剂方面，好气性纤维素分解菌似乎更具优势。故在此方面有进行探讨的必要。 ☆ 烟草地 — 柏树林 ☆☆ 玉米地 ☆☆☆ 玉米秆堆下土 — 建筑工地生上 分解程度（☆越多，分解越彻底） 土 样 — 扩展 — 乳白 整齐 圆 c 黄色不扩散色素 低凸面 湿润 黄色 整齐 圆 a 色素 凹凸 湿润 色泽 边缘 形状 菌落 棒状，成链状，不分枝 G+ c 单个椭圆形，偶有成链状 G+ a 形 态 革兰染色 菌 1.菌落描述 2.菌落理化性质 （2）糖类发酵试验（只对C菌） （1）革兰氏染色镜鉴 — — 阴性 甘露糖 — — 阴性 葡萄糖 — — 阴性 蔗糖 产气泡 产酸 结果 糖发酵液 滤纸崩解前后对比