人外周血巴细胞微核测定.pptVIP

人外周血淋巴细胞微核测定 1、微核必须位于细胞质中，与主核完全分开； 2、直径小于主核的1/3；无折光性；着色与主核相同或略浅。 （一）常规微核法 1. 采静脉血，肝素抗凝， 60Coγ射线照射血样，将0.5ml血加入4.5ml RPMI1640完全培养基中，37℃恒温培养72小时； 2. 收获细胞：打匀培养物，移至刻度离心管中，1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留下沉淀物。 3．低渗和预固定：加5ml 37℃预温的0.15M Kcl溶液低渗液，打匀，静置5分钟，再加入新配制的固定液0.5-1ml，打匀。1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留下褐色沉淀物。 （二）固定：加固定液5ml，打匀静置30分钟(或过夜)。1000rpm离心8分钟，弃去上清液，留0.5ml固定液，打匀，制成白细胞悬液。 （三）制片：滴白细胞悬液2-3滴于玻片上， 自然晾干。 （四）染色：用稀释Giemsa染色液5-30分钟，经蒸馏水轻轻冲洗，再将玻片晾干。 （五）镜检：将染色的玻片先用低倍镜扫描，观察细胞微核率。 1. 注意掌握低渗时间，避免低渗过度； 2. 比较与染色体标本制备的异同； * 南华大学预防医学与放射卫生实验教学中心 一、实验目的 掌握人外周血淋巴细胞微核 制备与分析技术 二、实验原理 微核实验是细胞遗传学的一种常用方法。70年代初由Matter和Schnide建立。 微核是染色体损伤的一种表现形式，它是染色体的无着丝粒断片或细胞分裂后期未纳入子核的落后染色体在子细胞细胞质中形成的阳性染色质体。辐射可引起人外周血淋巴细胞微核率升高，在一定剂量范围内微核率和剂量成线性关系。该法简便易行。我国已将微核列为放射病的诊断指标之一。 三、实验准备 离心机， 37℃恒温箱，试管架， 10毫升刻度离心管， 滴管，玻片，吸水纸，酒精灯， 0.15M KCl溶液，新配制的固定液（甲醇，冰醋酸 3:1）,Giemsa原液，磷酸缓冲液（pH 7.4）,香柏油，二甲苯 四、实验步骤 实 验 步 骤 实 验 步 骤 五、注意事项 *