UPLC测定生长抑素原料药的含量.doc

超高效液相色谱法测定生长抑素原料药的含量 摘 要： 建立快速，准确，灵敏的测定生长抑素原料药的方法。方法 采用沃特世ACQUITY UPLC超高液相色谱系统，以磷酸（取磷酸11Ml，加水900 mL，用三乙胺调PH至2.3，用水稀释至刻度1000）为流动相，（A）—乙腈 （B）梯度洗脱，流速：0.3ml/min；检测波长为215nm; 柱温45℃；进样体积2μL。结果 生长抑素在0.0051492mg/ml—0.12873mg /ml范围内有良好的线性关系（R2 = 0.9993），平均回收率（n=9）为99.1%。该检测快速，准确，灵敏度高，重复性好，为生长抑素原料药的质量控制提供了一种快速准确的方法。 关键词：超高效液相色谱 生长抑素原料药 生长抑素（Somatostatin）主要用于严重急性食道静脉曲张出血、急性胃或十二指肠溃疡出血、并发性急性糜烂性胃炎或出血性胃炎、胰、胆和肠瘘的辅助治疗，胰腺手术后并发症的预防和治疗，糖尿病酮症酸中毒的辅助治疗[1-3]。 超高效液相色谱法是一个新兴的领域，Waters ACQUITY UPLC?系统也出现不久，目前已发表的应用资料还很不足。与传统的HPLC相比，超高效液相色谱法的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍[4]。目前，UPLC多应用于代谢组学分析及其他一些生化领域，在天然产物的分析方面运用也逐渐兴起，因为在这些领域深入研究需要更高的分析精度。使用超高效液相色谱法对天然产物分析，特别是药物分析研究领域的发展将是一个极大的促进[5]。本实验选择采用超高效液相色谱法（UPLC）进行生长抑素原料药含量的测定，为提升生长抑素原料药的质量标准提供方法依据。 2 材料与方法 2.1材料 2.1.1仪器 沃特世ACQUITY UPLC超高液相色谱系统，配置ACQUITY PDA检测器及Empower2色谱管理软件（Mitford，Boston，MA,USA），十万分之一电子天平（型号： XP 205），超纯水制备仪（型号：arium 611UV），pH计（型号：PHS-3C） 2.1.2 试剂 乙腈为色谱纯（上海星可生化有限公司，批号：200912112），磷酸为分析纯（广东光华化学厂有限公司，批号，三乙胺为分析纯（东光华化学厂有限公司，批号：220081010），生长抑素原料药对照品（深圳市翰宇药业股份有限公司，批号含量:8.3% ），生长抑素原料药样品（深圳市翰宇药业股份有限公司，批号。 2.2 方法 色谱条件，美国沃特世ACQUITY 超高效液相色谱法系统，配置ACQUITY PDA检测器，色谱柱：ACQUITY BEN C18(2.1mm×50mm.1.7μm)流动相A：磷酸（取磷酸11mL，加水900 mL，用三乙胺调PH至2.3，用水稀释至刻度1000），流动相B:乙腈，进样体积：2μL，流速：0.35mL/min，检测波长：215nm，柱温：45℃。 洗脱程序：见表1 表1 梯度洗脱程序 时间（Min） 流动相A(％) 流动相B(％) 0 7.6 8.4 8.9 79 60 60 79 21 40 40 21 11.0 79 21 图1 生长抑素的UPLC色谱图 3结果 3.1 标准曲线 3 结果 3.1 标准曲线 取生长抑素原料药对照品12.873mg(精密称定，含量88.3%)，置50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.2、 0.4、 1.0、 2.0、 3.0、 5.0mL 转移至10mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为0.0051492 0.0102984 0.025746 0.051492 0.077238 0.12873mg/mL的对照品溶液。用上述超高效液相色谱法色谱条件进行测定，考察线性关系。结果显示，UPLC的回归方程及相关系数分别为y = 2E+07x-36684, R2 = 0.9993，线性良好。见表2 表2 标准曲线测定结果 3.1 系统精密度试验 取生长抑素原料药对照品12.815mg(精密称定，含量88.3%)，置250mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。制成浓度为0.05126 mg/mL生长抑素原料药溶液。用上述UPLC超高效液相色谱法色谱条件 ,在一天内连续测定六次.结果显示,生长抑素的峰面积的RSD为0.24％，系统精密度良好，结果见表3 表3 系统精密度考察结果（n=6） 编号 峰面积 平均峰面积 RSD(%) 1 858710 857152 0.24 2 856058 3 857670 4 860163 5 855097 6 8552