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- 2018-06-23 发布于浙江
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第十七章 螺旋体[教学]
第十七章 螺 旋 体
螺旋体是弯曲呈螺旋状、运动活泼的原核细胞型微生物。结构与细菌相似,如有细胞壁、原始核,以二分裂方式繁殖,对抗生素敏感等。
其中致病性螺旋体主要有钩端螺旋体属、疏螺旋体属、密螺旋体属等3个属。
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第一节 钩端螺旋体
是人畜共患病,鼠类和猪是储存宿主。在肾中存在,随尿排出,污染水和土壤,人类接触污染疫水。穿透皮肤粘膜侵入,并引起血症,产生如内毒素等物质,引起钩端螺旋体病,出现发热、头痛肌痛、眼结膜充血等中毒症状,患者有全身毛细血管损伤和微循环障碍,并引起肝肾功能损害。由于血清型、毒力数量不同以及免疫水平差异,有①流感伤寒型;②黄疽出血型;③肺出血型;④脑膜脑炎型;⑤肾功能衰竭型;⑥胃肠炎型等类型。
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应用显微镜凝集试验和凝集素吸收试验,可
进行血清群和型的分类。问号状钩端螺旋体
可分为25个血清群、273 个血清型,其中我
国至少存在19个血清群、74个血清型。我国
目前使用的问号钩端螺旋体参考株有14群15
型。
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微生物特性
螺旋细密和规则,一端弯曲使菌体呈问号状
故名钩端螺旋体。G-,但不易着色。常用
Fontana镀银染色法,被染成棕褐色。暗视
野显微镜下可见活泼运动、折光性强而成白
色的钩端螺旋体。
内鞭毛紧紧缠绕在原生质圆柱体表面呈螺旋
状,使钩端螺旋体活泼地沿长轴旋转运动。
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培养特性
营养要求较高,常用含10%兔血清的Korthof培养基,兔血清除促进钩端螺旋体生长外,尚有中和代谢产物毒性的作用。最适生长温度为28℃~30℃,最适pH为7.2~7.6,人工培养基中生长缓慢。在液体培养基中,分裂一次需8~lOh,培养一周左右,呈现为半透明云雾状生长,但菌数仅相当于普通细菌的1/10—1/100。
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抵抗力
对热抵抗力弱,60℃、1min即死亡。0.2%来苏、l:2000升汞、1%石炭酸经10~30min被杀灭。
对青霉素敏感。钩端螺旋体在夏秋季酸硷度中性的湿土或水中可存活20天以上,甚至数月之久,这在本菌的传播上有重要意义。
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标本采集
钩端螺旋体可从临床标本、携带者和自然界的水中分离获得。
标本采集包括血液、尿和脑脊液,发病早期(1周内)血液的阳性率高,1周后尿和脑脊液等的阳性率高。感染6~10天取血可检出抗体,在病程第3或4周达最高水平,此后抗体水平逐渐下降,血清学诊断则需在病程早期及恢复期分别采集血清,作双份血清试验。
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标本直接检查
1.取急性期病人血以4000r/min离心45—
60min,取1滴沉淀物置玻片上,加盖
玻片后作暗视野检查。也可用Fontana
镀银染色法染色后观察。
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2.核酸检测 采用同位素或生物素、地高辛
标记的特异DNA探针法,检出标本中钩
端螺旋体的核酸,较培养法快速、敏感。
若先用PCB技术先行扩增,再用探针确
定,则敏感度更加提高。
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分离培养
取钩端螺旋体血症期的病人血液2ml或发病后第2周的无菌弱碱性尿沉渣接种于Korthof培养基中,28℃孵育,因系需氧生长,故靠近培养液面呈半透明雾状混浊。
取培养物作暗视野检查,观察有无螺旋体生长。连续观察30d,如无生长方判为阴性
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抗体检测
显微镜下凝集试验是常用的方法。
(1)抗原制备:取标准菌株4—7天的培养物,每
视野50~60条活钩端螺旋体。
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(2)方法与结果:取病人血清以56℃,30min灭
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