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采油污水对水丝蚓SOD酶活性影响 　　摘要 为研究采油污水对生物SOD酶的影响，判定采油污水对生物体的损害程度。以水丝蚓为试验材料，利用酶液提取技术和比色法，测定经采油污水处理后的水丝蚓的SOD酶活性的变化情况，结果表明：随着采油污水浓度的增加，水丝蚓体内SOD酶的活性逐渐增高。可见采油污水对生物体具有毒性，毒性在一定范围内随采油污水浓度的增加而增加。因此，应加强采油污水综合化处理，以为大庆城市可持续发展和创建国际化大都市奠定环境基础。 　　关键词 采油污水；水丝蚓；SOD酶；吸光值 　　中图分类号 X524 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2012）22-0259-01 　　随着地下原油蕴藏量递减，原油开采难度大增。为保证原油产量，开发了多种采油工艺。聚合物驱油技术的应用，标志着油田已进入了三次采油阶段[1-2]。三次采油技术可提高石油采收率，但也产生了大量的采油污水。这种采油污水成分复杂，主要污染物包括原油、驱油聚合物、悬浮物、硫化物、氨氮及盐类等[3]，还含有大量水解聚丙烯酰胺（HPAM）。采油污水的生态毒性和对环境的污染引起人们广泛关注[4]。 　　水丝蚓（Limnodrilus hoffmeisteri）属环节动物门寡毛纲近孔寡毛目颤蚓科，多生活在有机质、腐殖质含量较多的污水沟、排水口等处。国内外多把水丝蚓作为环境指示生物，用来评价不同物质对环境的污染程度[5-6]。超氧物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）是一种重要抗氧化酶，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。SOD具有特殊生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。它可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原自由基对细胞造成的伤害。当生物体受到环境污染胁迫时，表现出SOD的变化，测定SOD的变化能显示出动物体受到环境胁迫的程度[7]。根据SOD活性变化情况反应出采油污水对水丝蚓危害程度，从而推测采油污水对环境的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　水丝蚓，购自花鸟鱼市场；采油污水，水样由油田水处理联合站提供。 　　1.2 水样处理及水丝蚓半致死浓度测定 　　首先将采油污水用8层纱布进行过滤，滤掉杂质及异物。假设经过滤后的污水浓度为单位1，加双蒸水稀释，得到0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 6个浓度梯度的采油污水水样。每个浓度梯度设置2个平行组，每组处理30条健康且无明显性分化特征的水丝蚓，实验室条件下处理12 h，随后进行12 h水复活处理，达到试验处理时间后进行准确计数。水丝蚓的中毒症状主要表现为身体泛白，失去伸缩能力，用解剖针碰触，运动异常，身体部分解体；以失去自由活动能力，全部解体为死亡特征[8]。 　　多次重复试验后，结果表明采油污水对水丝蚓的半致死浓度范围在0.2~0.3，在此浓度区间内，分别取0.20、0.22、0.24、0.26、0.28、0.30 6个浓度梯度，进一步测定采油污水对水丝蚓的半致死浓度。经多次试验摸索得出，利用采油污水对水丝蚓进行毒理试验时，水丝蚓的半致死浓度（LC50）为0.24[9]。经计算确定试验所用浓度为0.12（1/4致死浓度）、0.24（半致死浓度）、0.44（全致死浓度）。 　　1.3 粗酶液提取 　　设置0.12、0.24、0.44 3组不同浓度的采油污水和1个对照组，每组放入0.6~0.8 g水丝蚓，于实验室条件下处理4 h。将处理后的水丝蚓用吸水纸吸干，准确称量0.5 g，放入研钵中，加入少许石英砂，再加3 mL 0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.8），冰浴环境下匀浆，并用0.05 mol/L磷酸缓冲液（pH值7.8）定容至8 mL，0~4 ℃，11 000 r/min，离心处理15 min，取上清[10]。取粗酶液加入1/4体积的乙醇和3/20体积氯仿，轻轻搅拌，0~4 ℃，11 000 r/min，离心除杂15 min，取上清液。80 ℃，水浴处理5 min，再冷冻离心，0~4 ℃，11 000 r/min，10 min，取上清液。上清液加3/20体积的冷丙酮，0~4 ℃，11 000 r/min，冷冻离心10 min，取沉淀，并用pH值8.0的磷酸缓冲液溶解，得酶液，0 ℃保存[11]。 　　1.4 酶活单位测定 　　建立体系，测出不同酶含量的吸光值，计算出抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加的酶液量。以酶液量为横坐标，以其余杯中溶液抑制NBT光还原的相对百分率为纵坐标制作曲线，根据线性好的曲线所得出的函数关系计算抑制NBT光还原的相对百分率为50%时所加入的酶液量，以该酶液量作为1个酶活单位[12]。 　　1.4.1 蛋白质含量测定。取0.5 mL酶液+9.5 mL