高效液相色谱法分析定性蓝莓提取物中有关组分研究.docVIP

高效液相色谱法分析定性蓝莓提取物中有关组分研究 　　摘 要 蓝莓不仅营养丰富，而且还富含具有天然抗氧化性和清除自由基等生理活性作用的天然红色素，这使它成为一种重要的天然色素源，具有多种保健和药用功能。蓝莓所含的色素属花青素类色素，据报道有26种之多，主要是以飞燕草素、锦葵色素、矢车菊素、矮牵牛素和芍药素为基本结构组成的。而从蓝莓果中提取的蓝莓提取物其主要成份就是花青素。本文通过采用高效液相色谱法，对自提的蓝莓提取物开展色谱分析，通过定性分析研究判断花青素的有关组分组成以及相对的含量，为提高蓝莓提取物的品质、含量、提取工艺的改进，为下一步研究开发、规模发展提供一定的依据。 　　关键词 材料；试验方法；高效液相色谱法 　　中图分类号：S663.9 文献标识码：A 文章编号：1671-7597（2013）17-0055-02 　　1 材料与试验方法 　　1.1 主要试验材料 　　1.1.1 主要材料 　　蓝莓提取物（自提）。 　　1.1.2 主要试剂 　　标准品：飞燕草素葡萄糖苷（CAS-6906-38-3）Tokiwa提供； 　　锦葵色素葡萄糖苷（CAS-7228-78-6）Tokiwa提供； 　　矢车菊素（CAS-528-58-5）Cyanidin、Chloride提供； 　　矮牵牛素（CAS-1429-30-7）Specification提供； 　　天竺葵素（CAS-134-04-03）Chroma DEX提供； 　　芍药素（CAS-134-01-0）Chroma DEX提供； 　　乙腈、甲醇为进口色谱纯（迪马），甲酸、异丙醇为分析纯，水为市售纯净水。 　　1.1.3 主要的仪器设备 　　岛津2010LC四元低压梯度系统，LCsolution色谱工作站。检测器SPD，赛多利斯电子天平BS210s，超声波发生器As10200ADT。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 样品的配制 　　精密称取蓝莓提取物（自提）约50.0 mg，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声10分钟，加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 ?m过滤。 　　1.2.2 标准品的配制 　　取标准品包装各为5 mg/瓶的飞燕草素葡萄糖苷、锦葵色素葡萄糖苷、矢车菊素直接加甲醇溶解，并各自转移至对应25 ml棕色量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀，0.45 ?m过滤。然后各吸取上述三种标准品液各1 mL，置同一个10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，配制成三个标准品的混合液。 　　取标准品包装各为1 mg/瓶的矮牵牛素、天竺葵素和芍药素直接加甲醇溶解，并各自转移至各自10 mL量瓶中，各加甲醇至刻度，摇匀，经0.45 ?m过滤，备用。 　　1.2.3 色谱条件的摸索 　　1）岛津VP-ODS 150×4.6 mm，5 ?m，柱温35℃，检测波长523 nm，进样5 ?l，流量1 mL/min。 　　2）流动相的选择确定。 　　流动相A和B分别用①88（水90：甲酸10）和12（水40：甲酸10：甲醇22.5：乙腈22.5），②甲醇23：3%磷酸77，③6%甲酸89：（甲醇64：异丙醇36）12。 　　选择三种流动相，取1.2.1项下的样品，按1.2.3.1的条件，分别进行色谱分析。 　　从图中可以看出，以88（水90：甲酸10）和12（水40：甲酸10：甲醇22.5：乙腈22.5））作流动相共分离23种花青素组分，主要的前13个组分峰大部分峰型好而均匀，分离效果好；以甲醇23和3%磷酸77作流动相，共分离24种花青素组分，但峰对称性不好，大部分拖尾；以6%甲酸89和（甲醇64：异丙醇36）12作流动相共分离了12种花青素组分，数量少，分离能力差。综上所述，以88（水90：甲酸10）和12（水40：甲酸10：甲醇22.5：乙腈22.5））为最优流动相。 　　3）流动相洗脱梯度的比较。 　　取1.2.1项下的样品溶液，按1）的条件，流动相按2）项下确定的配比，在26 min内流动相B分别用①12%→35%→75%、②12%→40%→75%、③15%→50%→75%为洗脱梯度，进行色谱分析。 　　流动相B洗脱梯度为12%→35%→75%时，分离23个花青素组分，峰型大部分较好且分布均匀，基线较为平稳；流动相B洗脱梯度为12%→40%→75%时，个别峰的分离度略差；流动相B洗脱梯度为12%→50%→75%时，有些峰峰高下降，保留时间延长，分离度稍差。综上所述，流动相B洗脱梯度为12%→35%→75%为最优。 　　4）洗脱时间、流量的比较确定。 　　流动相A88（水90：甲酸10）和B12（水40：甲酸10：甲醇22.5：乙腈22.5），按1）的条件进行色谱分析，峰全部出完时间约23.5 min之后，60分钟之内基本没有