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任务四 微生物的分离、纯化、培养技术 了解纯种分离技术的原理 掌握无菌操作和纯种分离技术 微生物纯化、分离的原因 自然界中，微生物都是以群居的方式存在的 在人为条件下培养的微生物群体称为培养物(culture) 只有一种微生物的培养物称作纯培养物(pure culture) 纯培养的过程 通过分离、纯化技术从混杂的天然微生物群中分离出特定的微生物 接种技术 无菌操作技术 一、接种技术 接种工具 无菌技术(aseptic technique) 在分离、转接及培养纯培养物时，防止其被其他微生物污染的技术 纯培养物 环境 二、微生物分离纯化技术 分离(isolation)：从混杂微生物群体中获得只含有某一种微生物的过程称为微生物分离与纯化。 用固体培养基分离 用液体培养基分离 单细胞分离 选择培养分离 二元培养物 1. 利用固体培养基分离 原理： 微生物在固体培养基上生长形成的单个菌落，通常是由一个细胞繁殖而成的集合体 因此可通过挑取单菌落而获得一种纯培养 1. 利用固体培养基分离 值得指出的是： 在平板上的单个菌落并不一定保证是纯培养 因此，纯培养的确定除观察其菌落特征外，还要结合显微镜检测个体形态特征后才能确定 有些微生物的纯培养要经过一系列分离与纯化过程和多种特征鉴定才能得到  涂布 vs. 倾注 2. 用液体培养基分离纯培养 稀释法原理： 连续稀释，使一只试管里分配不到一个微生物 如果大多数平行稀释管里没有微生物生长，那么有微生物生长的试管得到的培养物就是纯培养物 4. 利用选择培养基分离 选择培养基 富集培养 倒平板 无菌操作 在操作过程中人为地排除一切微生物或一切不需要的微生物。 无菌操作要点一 ①杀死规定作业系统（如试管、三角瓶和培养皿）中的一切微生物，使作业系统变成无菌； 无菌操作要点二 ②在作业系统与外界的联系之间隔绝一切微生物穿过（如用火焰封闭三角瓶和试管等的开口,用棉花过滤空气、用滤器过滤水等）; 无菌操作要点三 ③在无菌室、超净操作台或空气流动较小的清洁环境中，进行接种或其他不可避免的敞开作业，防止不需要的微生物侵入作业系统。 作业-4 1、如何检验平板上某个单菌落是不是纯培养？ 2、请问在平板培养细菌为什么要倒平板培养？ Any questions? * * 　接种和分离工具 1．接种针 2.接种环 3.接种钩 4.5.玻璃涂棒 6.接种圈 7.接种锄 8.小解剖刀 视频录像 /programs/view/4GG6NWunN6w/ （1）稀释倾注平板法（pour plate method） 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 …） 然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可看出菌落 如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的 随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养 倾注平板 （2）涂布平板法（spread plate method） 将含菌的样品加入还比较烫的琼脂培养基，再倒平板，易造成某些热敏感菌的死亡 某些好氧菌会在琼脂中间缺氧影响生长 (3)平板划线分离法（streak plate method） (3)平板划线分离法（streak plate method） 连续稀释的过程 平板划线分离的方法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法 梯度稀释 3. 单细胞挑取分离法