第4章 药物定量分析与分析方法验证PPT课件.pptVIP

基线：检测器中只有流动相通过或虽有组分通过而不能为检测器所检出时，所给出的流出曲线。正常基线应为一条平行于横轴(时间轴)的直线。 漂移：基线随时间朝某一方向的缓慢变化称为漂移 色谱曲线和色谱峰 1、对仪器的一般要求 色谱柱：常用规格为4.6?250mm ?5um （1）正相：常用柱为硅胶柱、化学键合硅胶柱（即键合极性基团如：氰基-CN、氨基-NH2的硅胶柱） （2）反相：常用化学键合硅胶柱（即键合弱或非极性基团如：十八烷基（C18、ODS）、辛基（C8）的硅胶柱） 流动相的组分和流速：正相常用非极性的正已烷、环已烷等与弱极性的异丙醇、乙腈、甲醇组合；反相常用弱极性的乙腈、甲醇与强极性的水组合。流速常用1ml/min. 柱温常为室温，进样量常为10ul. 检测器：常为UV、PAD（DAD），有时也使用蒸发光散射检测器（ELSD）和MS。使用ELSD和MS时，流动相不能使用盐。 2、系统适用性试验 要 求：用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求，或规定分析状态下色谱往的理论板数、分离度、重复性和拖尾因子应达到规定的要求。 基本指标： 色谱柱的理论板数(n)、 分离度、 重复性、 拖尾因子。 (1)、色谱柱的理论板数(n) 在选定的条件下，注入供试品溶液(或该品种项下规定的内标物质溶液)，其理论板数为： n=5.54(tR/W h/2)2 其中， tR ——供试品主成份或内标物质峰的保留时间， W h/2——半高峰宽。 标 准：n应达到该品种项下规定的最小理论板数，否则，应改变色谱条件其达到要求。 (2)、分离度(R) 为便于准确测量，要求定量峰与其它峰或内标峰之间有较好的分离度。分离度(R)的计算公式为； R=2(tR2-tR1)/(W1+W2) 其中，tR为保留时间，W为峰宽度。除另外有规定外，分离度应大于1.50 (3)、重复性 用各品种项下的对照品溶液，以相同条件连续进样5次，除另有规定外，峰面积的相对偏差不大于2.0%。 对于内标法，也可按各该品种校正因子测定项下，配制相当于80%、100%、120%的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成三种不同浓度的溶液，分别进样3次，除另有规定外，平均校正因子的相对偏差不大于2.0%。 (4)、拖尾因子（T） T=W0.05h/(2d1) 其中， W0.05h为0.05峰高处的峰宽度，d1为峰极大至峰前沿的距离。除另外有规定外，T应在0.95－1.05之间。T1.05即为拖尾峰，T0.95即为前延峰。 3、测定法 内标法、外标法 (1) 内标法 　确定药物待测有效组分的校正因子(f)：　取一定量样品，在相同条件下分别测定内标物和药物对照品的峰面积或峰高，从而确定f。 f=(AS/CS)/(AR/CR) 其中，A－－峰面积或峰高，C－－浓度，S－－内标物，R－－药物对照品。 　测定药物待测有效组分：取一定量含有内标物的供试品溶液，测定内标物和待测有效组分的峰面积或峰高，从而确定待测组分浓度。 CX=(f?AX)/(A’S/C’S) (2) 外标法 　比较标准：供试品的对照品或标准品。 　方 法：标准曲线法、外标一点法。 　标准曲线法：用一系列不同浓度的标准溶液，测定浓度与峰面积或峰高的关系曲线。然后在相同条件下测定供试品的峰面积或峰高，再依据标准曲线确定其浓度。 　外标一点法：在相同条件下分别测定供试品和对照品溶液的峰面积或峰高，依据下式确定供试品浓度： CX=(CR ?AX)/AR (二) 气相色谱法 1. 对仪器的一般要求：　色谱柱（填充柱或毛细管柱）、载气（常为氮气）及其流速、柱温、氢火焰离子化检测器的检测条件、进样量。 2. 系统性实验 ： 同高效液相色谱法项下规定 3. 测定法 ： 同高效液相色谱法下规定 第三节 药品质量标准分析方法验证 验证目的：　对测定方法的效能进行评价，其指标可作为建立新的测定方法的实验研究依据，证明所采用的方法适合于相应的检测要求。 分析方法效能评价指标：　通常包括准确度、精密度（包括重复性、中间精密度、重现性）、专属性、检测限、定量限、选择性、线性与范围、耐用性。 验证项目：　1）鉴别；2）检查（即杂质定量或限度检查）；3）含量测定；4）溶出度、释放度检查中的定量测定方法；5）辅料的测定。 一、精密度 精密度（precision)：　指在规定的测定条件下，同一个均匀样品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。 目　的：　考察分析方法在不同时间、人员、实验室之间，测定结果的重复性和重现性。 验证的范围：　凡是定量测定项目，如含量测定、杂质定量测定。 （一）表示方法 　1）偏差（dev