05细胞培养1培养基制备%26相差显微镜1.ppt

细胞培养技术 细胞培养（cell culture) 细胞培养技术是选用各种细胞的最佳生存条件对活细胞进行培养和研究的技术。 即：从活体中取出小块组织分离出细胞，在一定条件下进行培养，使之能继续生存、生长、增殖的一种方法。 细胞培养（cell culture) 是指用机械或化学的方法将组织分散成单个细胞而进行的培养。 组织培养（tissue culture) 是指把活体的组织取出分成小块，直接置于培养瓶底或通过胶原纤维血浆支持物的培养瓶底来进行培养。其特点是：组织不失散，细胞保持原有的组织关系。 器官培养（organ culture） 是将活体中器官或器官一部分取出，在体外生长、生存，并使其保持器官原有的结构和功能特征的培养。其特点是：培养的器官在合适的条件下能生长和分化，存活数周或1年。 细胞培养常用术语 原代培养（primary culture）：从直接取自生物体细胞、组织或器官开始的培养。 传代培养（passage culture）：将细胞以一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶即称为传代培养。 注：传代（passage，subculture） 细胞系（cell line）：原代培养经首次传代成功后即成细胞系，由原先存在于原代培养物中的细胞世系所组成。 细胞株（cell strain）：通过选择法或克隆形成法从原代培养物或细胞系中获得的特殊性质或标志，并能稳定保持这些特性的培养物。 克隆（clone）：指单个细胞通过有丝分裂所产生的遗传性状相同的细胞群体。 生物安全柜 超净工作台 细胞培养的设施-培养室 漳州校区细胞实验课使用的细胞培养间….. 水浴锅 高压灭菌锅 培养瓶 培养皿 培养板 CO2 培养箱 倒置显微镜 普通显微镜 培养基 培养基 血清 胰酶 双抗(Penicillin-Streptomycin) 细胞培养基主要成分 水 糖 氨基酸 维生素 无机离子和微量元素 促生长因子 常见的商品化细胞培养基有:DMEM、MEM、PRMI-1640、 M199、Ham’s/F12等 1、血清的种类 胎牛血清：剖腹产的胎牛 牛血清 新生牛血清：出生24h之内的新生牛 小牛血清：出生10～30d的小牛 （人血清、马血清、羊血清、鸡血清） 2、血清的主要成分及主要作用 血清是由血浆去除纤维蛋白而形成，血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长活性是达到生理平衡的。 血 清 血清的主要作用 提供基本营养物质 提供贴壁和扩展因子（FN、LN） 提供激素及各种生长因子 （FGF、EGF、PDGF) 提供结合蛋白 对培养中的细胞提供某些保护作用 血清的使用与储存 使用前的处理 56℃灭活30min → 去除补体(可促进细胞溶 解)成分, 储存条件 灭活后分装成小包装（10mL、20mL、50mL）， －20 ℃储存；使用前4 ℃融化。 使用浓度 一般为2％～20％，最常用的是10％。 影响细胞生长的因素-温度 一般哺乳类及禽类细胞体外培养的适宜温度37～38℃，温度过高或过低都会影响到细胞的生长。 二氧化碳（CO2） 大多数细胞适于在pH 7.2～7.4条件下生长，低于pH 6.8或高于pH 7.6对细胞有害，甚至造成细胞退化或死亡。 动物细胞培养要求有5%的CO2，这是为了维持培养基的pH稳定。因为培养基中使用的是HCO3--CO32-缓冲对，环境中稳定的CO2可以保持培养基处在pH7左右。 羟乙基哌嗪乙硫磺酸（Hepes）：对细胞无毒性，也不起缓冲作用，主要作用是防止pH迅速变动，在开瓶通气培养或活细胞观察时能维持较恒定的pH值。 培养细胞的生长方式和类型 粘附型细胞：附着在某一固相支持物表面才  能生长的细胞。 如：成纤维细胞、心肌与平滑肌细胞、表皮细胞、骨与软骨细胞、肿瘤细胞 悬浮型细胞：不必附着于固相支持物表面，而 在悬浮状态下即可生长的细胞。 如：血、脾及骨髓培养的细胞及某些癌细胞 培养细胞的生长特点 粘附并伸展 是大多数体外培养细胞的基本生长特点。细胞在接种后很快便可见到细胞伸出伪足附着，与支持物形成一些接触点，接着细胞逐渐呈扁平或放射状伸展，逐渐形成上皮型或成纤维型或其他类型生长。 密度依赖