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姜脱毒方法比较与繁殖生根同步化培养技术研究 　　摘要：考察了茎尖大小、热处理催芽结合茎尖培养以及催芽后高温热处理结合茎尖培养等对姜（Zingiber officinale Rosc.）茎尖培养脱毒效果影响，并进行了脱毒姜试管苗的繁殖生根同步化培养基筛选。结果表明，0.3 mm的茎尖能够获得较为理想的成活率、成苗率，并且具有较好的脱毒效果；热处理结合茎尖培养能够提高脱毒效果，且催芽后高温短时间热处理的脱毒效果优于热处理直接催芽；确定脱毒姜繁殖生根同步化培养的最佳培养基为MS+2.50 mg/L 6-BA+0.4 mg/L NAA+0.2～0.3 mg/L ABT，在此培养基上生长的试管苗长势旺盛，根系发达，移栽成活率高。 　　关键词：姜（Zingiber officinale Rosc.）；脱毒方法；分生组织培养；同步化培养 　　中图分类号：S632.5 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）18-4522-04 　　姜（Zingiber officinale Rosc.）属姜科姜属（Zingiber）为多年生宿根草本植物，其新鲜根茎既是日常餐桌上重要的调味品、保健品，也是常用的中药材，为典型的药食两用经济作物。生姜味辛、性微温，归肺、脾、胃经，具有解表散寒、温中止呕、化痰止咳的功效，常用于治疗感冒风寒、呕吐、痰饮、喘咳、胀满、泄泻等，解半夏、天南星、鱼蟹及鸟兽肉之毒[1]。 　　姜为无性繁殖作物，在长期的栽培过程中会受到多种病毒的侵染，并且不断地在体内积累。研究表明侵染姜的病毒主要为黄瓜花叶病毒（CMV）和烟草花叶病毒（TMV）[2，3]。病毒与姜竞争生长必需的营养成分，使姜出现局部或系统花叶褪绿、植株矮化或叶畸形等症状，从而导致姜产量降低30%，严重者可减产45%以上，且品质和抗性也会受到不同程度的影响[4]。 　　目前，姜的无毒苗获得方法主要有热处理法和茎尖培养法。热处理法需要在高温、高湿环境中保存较长时间，且处理后的无毒苗较为疲软，在组培接种时表面消毒不易彻底，目前基本上不单独使用。近年来，使用茎尖培养对姜脱病毒的研究报道较多，但使用热处理结合茎尖培养法进行姜脱病毒的系统性研究报道较少。本研究对姜进行改良热处理结合茎尖培养，考察了茎尖大小、热处理催芽后结合茎尖培养及催芽后热处理结合茎尖培养的脱毒效果，并建立了脱毒姜试管苗的繁殖生根同步化组织培养体系，为脱毒姜苗的工厂化生产提供技术支持。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　姜为采自山东省莱芜市生姜产区的莱芜大姜，植株的健康根茎储藏至中国药科大学遗传育种教研室，经中国药科大学遗传育种教研室高山林教授复核为姜。 　　1.2 试验方法 　　1.2.1 茎尖大小对脱毒效果影响的考察 将莱芜大姜的姜块用经50%多菌灵800倍液浸泡处理的细沙铺底和覆盖，在室温（25 ℃）下催芽，待芽长至0.5～1.0 cm时，洗洁精清洗5 min，剥去外层叶子在自来水下冲洗30 min。在超净工作台上，用0.1%升汞溶液（加2～3滴吐温-20）消毒8～10 min，无菌水冲洗3～5次。解剖镜下剥取带有3个约0.4～0.5 mm叶原基、约2个0.3 mm 叶原基、约1个0.2 mm 叶原基和不带叶原基的茎尖分生组织接种到MS+2.00 mg/L 6-BA + 0.2 mg/L IAA培养基上培养60 d。每瓶接种3个茎尖，每个处理接种10瓶。培养温度（25±2）℃，光照度1 500 lx，光照时间14～16 h/d。计算成活率、成苗率，并在电镜下观察脱毒效果。 　　1.2.2 热处理催芽结合茎尖培养对脱毒效果影响的考察 根据茎尖培养的结果，取莱芜大姜的姜块，用经50%多菌灵800倍液浸泡处理的细沙铺底和覆盖，于36、40、44 ℃下催芽[5，6]，??芽长至2～3 cm时，切下1～2 cm的茎尖，按照茎尖剥取方法剥下约0.3 mm的茎尖分生点接种在MS+2.00 mg/L 6-BA +0.2 mg/L IAA培养基上培养60 d。每瓶接种3个茎尖，每个处理接种10瓶，培养条件同“1.2.1”。计算成活率、成苗率，并在电镜下观察脱毒效果。 　　1.2.3 催芽后高温热处理结合茎尖培养对脱毒效果影响的考察 取莱芜大姜的姜块，用经50%多菌灵800倍液浸泡处理的细沙铺底和覆盖，在室温（25 ℃）下催芽，待芽长至0.5～1.0 cm时，洗洁精水清洗5 min，剥去外层叶子在自来水下冲洗30 min。在超净工作台上，用0.1%升汞溶液（加2～3滴吐温 -20）消毒8～10 min，无菌水冲洗3～5次。置于60 ℃的高温下分别处理15、30、45、60和75 min，再在无菌条件下切取约0.3 mm的茎尖分生点接种在MS+2.00 mg/L 6-BA +0.