结核病实验室诊断方法标准化及其注意事项..ppt

结核病实验室诊断方法标准化及其注意事项 中国CDC 结核病防治临床中心 王 甦 民 现代结核病控制策略 DOTS 政府承诺 开展以痰检为主的病人发现工作 应用标准短程化疗并实施督导管理 建立正规的药物供应系统 建立监测系统 我国结核病控制目标 分枝杆菌生物学概述 分枝杆菌属裂殖菌纲，放线菌目，种类甚多，目前已命名的有50多种，一般可分为缓慢生长和快速生长两大类。 结核分枝杆菌是1882年郭霍（Robert Koch）从肺结核病人痰标本中发现。是人类结核病的主要病原菌。 分枝杆菌呈分支状生长， 营养要求比普通细菌高，是一种生长缓慢的革兰氏阳性杆菌。 经石炭酸复红染液染色后，可以抵抗盐酸酒精脱色，故称此类细菌为抗酸菌。 分枝杆菌分类 结核分枝杆菌结构 在电子显微镜下可见菌体微细结构。结核分枝杆菌由细胞壁、细胞膜、细胞质、核物质组成。 细 胞 壁 厚度为10~35nm，较一般细菌的细胞壁厚。 含有大量脂类，具有坚韧性和疏水性。 功能： 保护细菌的固有形态 抵抗酸碱物质及宿主细胞对细菌的破坏和 杀伤 如果细胞壁有缺陷，细菌只能在高渗环境下生存，则称此类细菌为L型细菌。 细 胞 膜 细胞壁内层围绕于细胞质外的富于弹性的半透膜。 主要成分是脂类（磷脂）和蛋白质。 功能： 细菌与外界环境进行物质交换 在细胞内一系列代谢活动中起重要作用 细 胞 质 是带粘滞性的液体，充满了细胞膜内的整个空间。 细胞浆内含有核糖体及其他多种颗粒。 功能： 细胞合成蛋白质和核酸等生命活性物质的 场所 细菌对营养物质进行同化作用和异化作用的场所 核 质 由单一双股DNA组成。 电镜下由极细的纤维物质所组成，与细胞质不分开，无核膜、核仁。 功能：细胞遗传的物质基础。 菌体主要成分 脂类 多糖 蛋白质 核酸 盐类 脂 类（1） 结核菌体脂类含量比其他细菌高，占细胞壁干重的60％，是引起结核病特征性变化与表现的物质基础。 脂质含量与细菌毒力相关，毒力强的结核分枝杆菌（Mtb）含脂最高。 脂质主要有磷脂、脂肪酸、蜡质等成分，多与蛋白质、多糖以结合形式存在。 脂 类（2） 磷脂：刺激机体单核细胞增生，增强菌体成分诱导机体致敏的作用。 索状因子：与Mtb毒力密切相关。 硫脂：含有S元素的脂类，与细菌抵抗力有关。 蜡质：占脂质总量48％，分A、B、C、D。 结核菌酸：促进机体形成结核结节。 分枝菌酸：为结核菌菌体的重要成分，与结核菌的抗酸性有关。 多 糖 由阿拉伯半乳聚糖、阿拉伯甘露聚糖、甘露聚糖和葡聚糖等组成。 多以脂类、蛋白质和核酸等结合形式存在。 是免疫反应的重要抗原物质。 蛋 白 质 Mtb含多种蛋白质组分，由不同菌体蛋白及活菌在分泌过程中分泌于细胞外的多种蛋白组成。 结核菌的主要抗原性物质。 结核菌素(OT)、纯蛋白衍生物（PPD）为多种蛋白的复合抗原，可刺激机体免疫应答。 核 酸 RNA含量比DNA高4－5倍。 RNA分布于细胞质内，DNA存在于细胞核区域内。 DNA是遗传物质，将遗传信息传给子代，并指导RNA的合成。 RNA是蛋白质和其他细胞成分合成所必须的物质。 盐 类 钙、钾、镁、铁、磷等，约占菌体成分的 6％。  营养与发育 结核菌是兼性需氧菌，在有氧和含有比较低氧的环境下均能生存，比如骨结核，淋巴结核。 在少量二氧化碳的环境中生长的也很好。 结核菌生长的适宜温度和人体相近为370C 结核菌生长所必需的元素有氧、碳、氮、氢、磷、钾、镁等。 结核分枝杆菌形态 结核菌是兼性需氧菌，无鞭毛、荚膜，无运动能力； 形状：0.3 - 0.6×1 - 4微米的细长杆状，直或稍弯，镜下常堆积成团、成束、排列杂乱无章，也有呈串珠样、链状、索状者。 革兰氏染色阳性，萋-尼氏染色镜下的抗酸杆菌为淡兰色背景下的红色或粉红色细长杆菌。荧光染色镜下的抗酸杆菌在暗色背景下呈黄绿色或橙色荧光。 抗 酸 性 分枝杆菌不易着色，一旦着色可以抵抗盐酸酒精的脱色，称为“抗酸性”。 抗酸性是分枝杆菌的重要特征。其化学基础是分枝菌属的细胞壁脂质含量较高，并含有大量分枝菌酸。 抗酸性与细菌细胞壁的完整性关系密切，若菌体自溶（如标本保存时间过长、温度过高）、结核菌的异型性（如：L-型菌、干酪或脓液中的结核菌）可能失去抗酸性。 生 长 特 性 生长适宜温度37C，PH6.8-7.2。营养要求较高。在常用的罗氏（Lowenstein-Jensen）培养基上生长的菌落粗糙、凸起、致密，有表面皱折，呈颗粒、结节或菜花样，乳白色或米色，不透明。 结核菌生长缓慢，在一般培养基上分裂一代需要10-18小时，根据接种菌量的多少，一般10-30天肉眼可见菌落生长。 结核病细菌实验室布局原则 1、结核病细菌