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灵芝多糖提取工艺优化 　　摘要：以灵芝为原料提取多糖，采用蒽酮-硫酸法测定提取液中的多糖含量，设计单因素试验考察提取方法和提取溶剂组合对多糖提取率的影响，并采用正交设计优化提取工艺。结果表明，采用回流提取法，先后以蒸馏水和体积分数55%的乙醇溶液作提取溶剂，每次提取时浸润时间0.5 h、料液比（m灵芝∶V提取溶剂）为1∶20（g/mL）、提取时间1.5 h，所得灵芝多糖的提取率较高，为1.75%。 　　关键词：灵芝多糖；提取工艺；优化 　　中图分类号：R284.2；S567.3+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）15-3632-03 　　灵芝始载于《神农本草经》，在我国有悠久的药用历史，在《中国药典》中收录作为药材灵芝来源的是赤芝[Ganoderma lucidum （Leys.exFr.）Karst]或紫芝[G. japonicum （Fr.）Hoyd]的干燥子实体[1]。灵芝分布于我国许多省区，生于栎树及其他阔叶树木桩上，多为野生，许多省区已有人工栽培。传统中医视灵芝为名贵滋补类药材，有扶正固本、延年益寿之功效。现代研究表明，灵芝具有抗肿瘤、抗衰老、调节免疫、降血糖、保护肝脏、保护心脏、改善血液循环、抗炎镇痛、促进睡眠等作用[2-6]。灵芝的药用成分非常丰富，已分离得到的有效成分有数十种[5，6]，其中灵芝多糖是灵芝中主要的生理活性物质之一，具有抗肿瘤、提高机体免疫力、消除自由基、抗血栓、降血糖等作用，被认为是灵芝扶正固本的重要有效成分[7-10]。近年来，灵芝已成为人们日常较为关注的功能保健品，灵芝多糖的提取测定和药用研究也受到重视[11-13]。本研究以常见的赤芝为原料，以灵芝多糖提取率为指标，对灵芝多糖的提取方法和条件进行研究，旨在寻找高效低耗的灵芝多糖提取技术，为工业化提取制备灵芝多糖制剂提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　1.1.1 材料 灵芝购于广西壮族自治区玉林市大型药材市场，经鉴定为赤芝，用前粉碎，60 ℃下干燥备用。 　　1.1.2 仪器 主要有WT5002N型电子分析天平（常州万泰天平仪器有限公司）、WG800SL23-K6微波炉（格兰仕集团）、KQ3200DB型数控超声波清洗仪（上海普渡生化科技有限公司）、UV1100型紫外可见分光光度计（上海美谱达仪器有限公司）。 　??1.2 试验方法 　　1.2.1 葡萄糖标准曲线的绘制 精确称取干燥至恒重的葡萄糖标准品200 mg，置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，准确吸取10 mL置100 mL容量瓶中，稀释至刻度，即得浓度为0.2 mg/mL的葡萄糖标准品溶液。精确称取蒽酮0.1 g，置棕色瓶中，加入100 mL 80%的硫酸溶液溶解，摇匀，放冰箱中备用。分别精确吸取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL葡萄糖标准品溶液置于25 mL干燥的具塞比色管中，加蒸馏水至2.0 mL，精确加入硫酸蒽酮溶液6 mL，摇匀，置沸水浴中加热15 min取出，放入冷水浴中15 min，放至室温，以2.0 mL水按同样显色操作作为空白对照，采用紫外可见分光光度计在625 nm波长处测吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标（x//mg/mL）、A625 nm为纵坐标（y）绘制标准曲线，得到回归方程y=30.936x+0.022，r=0.998 9。 　　1.2.2 灵芝多糖的提取 称取灵芝粉末约3 g，加45 mL蒸馏水，称定质量，浸润60 min，电炉加热提取，煎煮2次，每次煎煮2 h，放冷后称定质量，用水补足减失的质量。合并2次提取液，过滤，取滤液，用电炉加热蒸发浓缩至原体积的1/6，浓缩液加入3倍体积的无水乙醇溶液，于4 ℃冰箱中静置过夜，抽滤，依次用无水乙醇溶液、丙酮、乙醚洗涤沉淀2～3次，60 ℃干燥，得灵芝粗多糖。 　　1.2.3 灵芝多糖提取率的计算 ①换算因子的计算。精确称取干燥至恒重的灵芝粗多糖40 mg置50 mL容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，摇匀，精确吸取2 mL置于25mL干燥的具塞比色管中，另取2 mL蒸馏水作空白对照，按“1.2.1”方法操作，测定A625 nm，按公式（1）计算换算因子f。②提取率。精确量取样品提取液5 mL置于25 mL容量瓶中，加蒸馏水稀释至刻度，吸取待测多糖溶液2.0 mL于干燥的具塞比色管，按“1.2.1”方法操作，测定A625 nm，计算灵芝多糖提取率。 　　f=m糖/（C糖×D） （1） 　　灵芝多糖提取率=■×100% （2） 　　式中，m糖表示灵芝多糖的质量（mg）；C糖表示灵芝多糖溶液中的葡萄糖浓度（mg/mL）；D表示稀释倍数；C样表示样品溶液中的葡萄糖浓度（mg/mL）；m样表示灵芝样品质量（