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猪圆环病毒2型ORF2基因及其编码蛋白研究概况 　　摘要：结合国内外对猪圆环病毒2型（porcine circovirus 2，PCV2）的研究，重点对猪圆环病毒2型ORF2基因及其编码蛋白的抗原表位和功能应用研究进行简要综述，为猪圆环病毒2型新型疫苗研究和建立诊断检测方法研究方面提供参考。 　　关键词：猪圆环病毒；ORF2 基因；抗原表位 　　中图分类号：S858.28 文献标识码：B 文章编号：1007-273X（2013）01-0078-04 　　猪圆环病毒2型（Porcine circovirus 2，PCV2） ，是引起猪断奶后衰竭综合征（Postweaning multisystemic Wasting Syndrome，PMWS）的主要病原之一。该病毒基因组为单股环状负链DNA 分子，有11个开放阅读框（ORF） ，ORF2 编码病毒的结构蛋白-衣壳蛋白，具有较好的免疫基因原性，可以刺激机体产生抗体。现将PCV2 ORF2基因及其编码蛋白的研究概况做一综述，以供参考。 　　1 结构蛋白及抗原表位研究 　　在PCV2 中，ORF2起始密码子起始于第1 033 或1 034 位核苷酸，共有702 个碱基，编码234 个氨基酸（基因序列反义链上ORF2终止子由TAA变为AAG，而造成ORF2阅读框加长，全长705bp，其终止子为TGA），编码的衣壳蛋白为病毒主要结构蛋白（Cap蛋白），相对分子质量为30 000，具有较好的免疫原性，ORF2蛋白可以自我装配成病毒衣壳颗粒，且两种病毒之间的同源性达到67%。PCV两种基因型的Cap蛋白上存在共同的抗原表位，但两者无抗原交叉性，推测原因是整个Cap蛋白遮盖了它们共同的抗原表位。在PCV1-Cap蛋白上的102～104位氨基酸（NYS）上和PCV2的143～145位氨基酸（NYS）上都有单一的糖基化表位存在[3]。Liu等[4]将ORF2基因连接到MBP-His（8）-tag基因的3端，在细菌中表达ORF2融合蛋白，该融合蛋白可被抗PCV2多克隆抗体和PCV2感染猪的血清识别，表明ORF2蛋白与PCV2的免疫反应性有关。融合蛋白纯化后，经电镜负染观察可见病毒粒子样的颗粒，颗粒密度比PCV2病毒粒子的密度要低，但形态与病毒粒子相似，直径约为17nm。 　　研究表明，ORF2基因编码的N端41个氨基酸为核定位信号，不包含主要的抗原区域，而且N端具有大肠杆菌稀有密码子（约占30），以AGGAGG，AGAAGG等串联形式存在影响外源蛋白的表达[5]。Lekcharoensuk等[5]使用PCV2全病毒研制了7种不同的抗PCV2衣???蛋白的单克隆抗体，通过对PCV2 ORF2的基因序列分析，克隆PCV1相同位点基因片段进行置换，构建了不同的PCV1/PCV2-ORF2嵌合体。通过ELISA试验，用各种单克隆抗体对不同的嵌合体进行识别，在ORF2的第47～63、165～200以及C端最后4个氨基酸具有至少5个重叠的B淋巴细胞抗原表位。刘光清等[6]以PCV2基因组序列为材料，采用Garnier-Robson方法、Chou-Farplus方法和Karplus-Schulz方法预测了其结构蛋白的二级结构；采用Kyte-Doolittle方法对结构蛋白的亲水性进行了分析，采用Emini方法预测了结构蛋白的表面可能性，采用Jameson-Wolf方法预测了蛋白的抗原指数，综合评价了PCV-2型结构蛋白的B淋巴细胞抗原表位。结果表明，PCV-2结构蛋白形成α螺旋结构的能力弱，但是该蛋白含有较多的β折叠和转角结构，即具有丰富的二级结构。结构蛋白中具有多处抗原指数较高的区段，其中羧基端含有潜在的B淋巴细胞优势抗原表位，为猪圆环病毒的反向疫苗学的研究提供了一定的理论依据。Stevenson等[7]对PCV2 ORF1、ORF2、ORF3进行了T淋巴细胞抗原表位分析，分别构建了20个线性的重叠交错抗原表位表达系统，通过免疫猪后对抗原表位免疫显性的初筛以及进一步的选择，证明了在ORF1的氨基酸残基第81～100位和201～220位，以及ORF3氨基酸残基31～50位存在重叠的T淋巴细胞抗原表位。而在ORF2上没有线性的T淋巴细胞抗原表位，这可能是因为T淋巴细胞反应和核衣壳蛋白的构象有关。 　　2 ORF2蛋白的功能研究 　　2.1 疫苗研究 　　有研究表明，PCV2 ORF2某些基因与病毒的毒力和复制有关。Fenaux等[8]将圆环病毒2型在PK-15上连续传代120次，同时收集不同代次的病毒1，对其进行生物学，遗传学以及试验特性分析。VP120（120代病毒）位于衣壳蛋白基因的两处核苷酸发生突变。以PCV2 VP1、VP120的半数感染量分别用滴鼻和肌肉注射方式感染试验猪，并设生理