第三章 高效液相色谱法分析.pptVIP

* * 第九节 液相制备色谱 色谱法最大的优势是高效分离性能，是分离分析的重要手段。前面所用的色谱柱叫做分析型色谱柱（目的是分离，微量样品）。但是在科学研究和生产实践中，有时要求我们不仅把试样中各组分分离开，而且要获得某些组分的纯品，这就是制备色谱。所制备色谱的目的就是利用色谱分离技术获得试样中需要组分的较大量纯品，相应的色谱柱叫做制备型色谱柱。获得高纯物质（色谱纯）的有效方法。 * 分析型色谱柱：内径一般为1～6 mm。常用的标准柱型是内径为 4.6 或 3.9mm（长度为 15 ～ 30cm）； 制备型色谱柱：内径很大，从直径约为10mm的实验室半制备柱到直径为500mm的工业制备柱。 如果想知道某个组分的化学结构，而鉴定一个未知组分的化学结构，需要采用NMR、IR、MS、元素分析等手段，这是必须获得mg级的纯品（Page97,Table 3-4）；有时为了研究工作的需要，要制备几十mg甚至g级的纯品（用这种方法获得的纯品叫色谱纯）等，像这些情况，可采用直径为几十mm的半制备柱；在工业上，如果想获得大量的纯品供工业生产或商品出售，这是要用直径可大至500mm的工业制备柱。当然制备色谱一般要配大流量的高压输液泵。 * * 1.色谱柱的柱容量（柱负荷） 对分析柱：不影响柱效时的最大进样量； 对制备柱：不影响收集物纯度时的最大进样量； 超载：进样量超过柱容量。柱效迅速下降，峰变宽。 超载可提高制备效率，以柱效下降一半或容量因子k降低10%为宜。 2. 液相制备色谱的方法 收集组分时，通常有以下情况： （1）可获得良好分离，主峰 使用制备柱，超载提高效率； （2）两主成分之间的小组分； 超载，分离切分使待分离组分成为主成分（富集）后，再次分离制备。 * 2.制备型液相色谱仪 典型的制备型液相色谱仪的结构及流路如图3-30所示。：结构与分析型一样，但泵流量大（20～100mL/min）、进样量大、采用制备柱（内径20～50mm，柱长50cm）；在检测器后增加自动馏分收集器。 * 一、高效毛细管电泳(HPCE)基本原理 电泳是指带电离子在电场中的定向移动，不同离子具有不同的迁移速度，迁移速度与哪些因素有关？ 当带电离子以速度ν 在电场中移动时，受到大小相等、方向相反的电场推动力和平动摩擦阻力的作用。 电场力：FE = qE 阻 力：F = fν 故： qE = fν q—离子所带的有效电荷； E —电场强度； ν—离子在电场中的迁移速度； f —平动摩擦系数 ( 对于球形离子： f =6πηγ；γ —离子的表观液态动力学半径；η —介质的粘度； ) ３-10 毛细管电泳 * 所以，迁移速度： （球形离子） 物质离子在电场中差速迁移是电泳分离的基础。 淌度μ ：单位电场强度下的平均电泳速度。 * 二、电渗现象与电渗流 1.电渗流现象 当固体与液体接触时，固体表面由于某种原因带一种电荷，则因静电引力使其周围液体带有相反电荷，在液-固界面形成双电层，二者之间存在电位差。 当液体两端施加电压时，就会发生液体相对于固体表面的移动，这种液体相对于固体表面的移动的现象叫电渗现象。 电渗现象中整体移动着的液体叫电渗流（electroosmotic flow ，简称EOF）。 * 2.HPCE中的电渗现象与电渗流 石英毛细管柱，内充液pH3时，表面电离成-SiO-,管内壁带负电荷，形成双电层。 在高电场的作用下，带正电荷的溶液表面及扩散层向阴极移动，由于这些阳离子实际上是溶剂化的，故将引起柱中的溶液整体向负极移动，速度ν电渗流。 * 3.HPCE中电渗流的大小与方向 电渗流的大小用电渗流速度ν电渗流表示，取决于电渗淌度μ和电场强度E。即 ν电渗流 = μ E 电渗淌度取决于电泳介质及双电层的Zeta电势，即 μ = ε0εξ ε0—真空介电常数；ε—介电常数；ξ—毛细管壁的Zeta电势。 ν电渗流 = ε0εξ E 实际电泳分析，可在实验测定相应参数后，按下式计算 ν电渗流 = Lef/teo Lef —毛细管有效长度； teo—电渗流标记物（中性物质）的迁移时间。 * HPCE中电渗流的方向 电渗流的方向取决于毛细管内表面电荷的性质： 内表面带负电荷，溶液带正电荷，电渗流流向阴极； 内表面带正负电荷，溶液带负电荷，电渗流流向阳极； 石英毛细管；带负电荷，电渗流流向阴极； 改变电渗流方向的方法： （1）毛细管改性 表面键合阳离子基团； （2）