第八章 工业染菌的防治课件.pptVIP

第八章 工业染菌的防治 染菌 在发酵培养中侵入了有碍生产的其他微生物。 几乎所有的发酵工业，都有可能遭受杂菌的污染。染菌的结果，轻者影响产量或影响产品外观及内在质量，重者可能导致倒罐，甚至停产，是发酵工业的致命伤。 发酵染菌能给生产带来严重危害，防止杂菌污染是任何发酵工厂的一项重要工作内容。尤其是无菌程度要求高的液体深层发酵，污染防止工作的重要性更为突出。 一、染菌的检查与判断 1、染菌的检查 （1）显微镜检查法 用革兰氏染色法(Grams stain)对样品进行涂片、染色，然后在显微镜下观察微生物的形态特征，根据生产菌与杂菌的特征进行区别、判断是否染菌。 检查杂菌最简单、最直接，也是最常用的检查方法之一。 （2）平板划线培养或斜面培养检查法 平板制好后，应先保温24小时，确定无菌，将待检样品在无菌平板或斜面上划线，分别于37 ℃、27 ℃进行培养，一般24 h后即可进行镜检观察，检查是否有杂菌。有时为了提高平板培养法的灵敏度，也可以将需要检查的样品先置于37 ℃条件下培养6 h，使杂菌迅速增殖后再划线培养。 （3）肉汤培养基检查法（酚红变色pH6.8-8.4） 组成：0.3％牛肉膏、0.5％葡萄糖、0.5％氯化钠、0.8％蛋白胨、0.4％的酚红溶液（pH7.2，呈红色）的酚红肉汤作为培养基。 方法：将待检样品直接接入经完全灭菌后的该肉汤培养基中，分别于37 ℃、27 ℃进行培养，每6 h观察一次微生物的生长情况，并取样进行镜检，该肉汤培养基由红色变为黄色或产生浑浊，即判断为染菌。 2、三种检查法的比较 显微镜检查方法简便、快速，能及时发现杂菌，但由于镜捡取样少，视野的观察面也小，因此不易捡出早期杂菌。此时检查结果应以平板划线和肉汤培养结果为主要根据。 平板划线法的缺点是需经较长时间培养（一般要过夜）才能判断结果，且操作较繁琐，但它要比显微镜能捡出更少的杂菌。 以上3种检查法未发现染菌，还不能肯定未被染菌，原因是以上检查法只能检查杂菌浓度较大的染菌情况（1个/ml）。平板划线和肉汤培养应做三个平行样，酚红肉汤和平板划线培养样品应保存至放罐后12小时，确定为无菌时方可弃去。 3、发酵过程的异常现象来判断染菌 （1）溶解氧水平异常显示染菌（谷氨酸） （2）排气中CO2异常显示染菌 CO2的含量变化是有规律的； 染菌引起糖的消耗变化，染好氧性杂菌，糖耗加快， CO2含量增加；染噬菌体，糖耗减慢， CO2含量减少。 生产同一产品的几个发酵罐都发生染菌，这种染菌如果出现在发酵前期可能是种子带杂菌，如果发生在中后期则可能是中间补料系统或油管路系统发生问题所造成的。通常同一产品的几个发酵罐其补料系统往往是共用的，倘若补料灭菌不彻底或管路渗漏，就有可能造成这些罐同时发生染菌现象。另外，采用培养基连续灭菌系统时，那些用连续灭菌进料的发酵罐都出现染菌，可能是连消系统灭菌不彻底所造成的。 3、个别发酵罐连续染菌和偶然染菌 个别发酵罐连续染菌大多是由设备问题造成的，如阀门的渗漏或罐体腐蚀磨损，特别是冷却管不易觉察的穿孔等。设备的腐蚀磨损所引起的染菌会出现每批发酵的染菌时间向前推移的现象，即第二批的染菌时间比第一批提早，第三批又比第二批提早。至于个别发酵罐的偶然染菌其原因比较复杂，因为各种染菌途径都可能引起。 常见的设备、管道“死角” （1）发酵罐不锈钢衬里破裂形成的死角 （2）发酵罐罐底脓疱状积垢 培养基中钙盐类及固形物，在发酵罐的搅拌功率较小和采用环式空气分布管的情况下，由于在灭菌时培养基得不到强有力的翻动，罐底会形成一层1－2毫米甚至更厚的膜层，这种膜层具有一定程度的绝热作用，所以膜层下潜伏的耐热菌不易被杀死 （3）法兰连接的死角 （4）底轴承和环式空气分布器形成的死角 （5）接种管路的死角 五、噬菌体感染的防治 （一）噬菌体 噬菌体是病毒的一种，直径约0．1微米，体积微小，只有在电子显微镜下才能看见。 可以通过细菌过滤器，所以通用的空气过滤器不易将其除去。 噬菌体是一种非细胞结构的生命，但只有进入宿主细胞才具有生命特征，并具有寄主专一性。 2、分发酵罐（或罐组）染菌 四、染菌的防止 1、防止种子带菌 制备种子时对沙土管及摇瓶严格加以控制。 沙土制备时要多次间歇灭菌 注意接种时的无菌操作 无菌室和摇床间都要保持清洁。无菌室内要供给恒温恒湿的无菌空气，还要装紫外灯用以灭菌，或用化学药品灭菌。 2、防止设备渗漏 发酵设备及附件由于化学腐蚀、电化学腐蚀，物料与设备摩擦造成机械磨损以及加工制作不良等原因会导致设备及附件渗漏。 设备上一旦渗漏，就会造成染菌，例如冷却盘管、夹套穿孔渗漏，有菌的冷却水便会通过漏孔而进入发酵罐中招致染菌。阀门渗漏也会使带菌的空气或水进入发酵罐而造成染菌。 设