微山湖河蟹养殖区异养细菌产酶情况对河蟹养殖影响研究.docVIP

微山湖河蟹养殖区异养细菌产酶情况对河蟹养殖影响研究 　　摘要 为了解微山湖河蟹养殖区水体和底泥中异养细菌胞外产酶（蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶、脲酶）情况，对微山湖养殖区微生物进行了初步分离和筛选，并在含有蛋白质、脂肪、淀粉、尿素的固体培养基上培养观察并测量记录菌落和水解圈大小。结果表明：产蛋白水解酶和脂肪水解酶的细菌明显多于产淀粉水解酶和脲酶的细菌数量，同时菌株一般多产蛋白水解酶和脂肪水解酶，少产淀粉水解酶和脲酶，这对河蟹养殖的酶用饲料具有很大的影响。 　　关键词 胞外酶；水解圈；酶用饲料；河蟹养殖；微山湖 　　中图分类号 S966.16 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2013）18-0254-02 　　近年来，由于人们生活水平的提高，对水产品的需求越来越大，但天然水产品却供不应求，进而产生了许多河蟹养殖区以满足人们对河蟹的需求[1]。目前，饲料工业更多青睐于微生物酶的使用，饲用酶制剂目前被广泛使用，它是通过特定生产工艺加工而成的包含单一酶或混合酶的工业产品。动物直接摄入酶产品具有多项保健效果：补充内源酶（主要是指消化酶类如淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶等）的不足，激活内源酶的分泌；水解非淀粉多糖（NSP）等抗营养因子，降低消化道内容物粘度；破坏植物细胞壁，使包裹在细胞中的营养物质充分地释放出来，从而增加与消化酶的接触面，提高消化吸收率；提高机体代谢水平，增强免疫力等[2]。近年来的研究表明，酶不仅直接参与营养物质消化和吸收，也影响其代谢和参与有关激素的调节作用；改变消化部位，使某些物质的消化场所由盲肠转移到小肠，减少后肠微生物发酵，提高其消化率[3]。此外，外源酶还有助于改善消化道内环境，如平衡内源酶的分泌，减少肠黏膜细胞的脱落；改变肠壁结构，提高养分吸收能力；减少细菌性疾病的发生等[4]。酶用饲料不仅能消除饲料抗营养因子的有害作用，促进养分的消化和吸收，提高畜禽的生长速率、饲料转化效率和增进畜禽健康，而且能减少养殖业排污中氮、磷的排放，保护生态环境。应用饲料酶制剂是现代化养殖业中经济与生态效益兼顾的重要科学技术措施[5]。 　　目前，饲用酶制剂有单一酶制剂和复合酶制剂，而且大多是诱导酶类，因此向培养基中加入诱导物就会增加胞外酶的产量[6]。菌种不同，生产酶制剂所需工艺条件也不同，其最佳工艺参数必须通过试验来确定[7]。只有为培养物提供一个最适的环境，菌体的代谢活动才能得到最充分的表达，酶产量才能提高。提高微生物酶制剂的产量、活性和稳定性，增强产品的市场竞争力是很重要的发展方向。 　　细菌胞外酶是指那些在细胞内合成后穿过细胞质膜的酶，它们有些镶嵌在质膜上，有些存在于周质空间，有些则完全脱离其生产者，扩散到环境中[8]。特别是异养细菌是水环境中胞外酶的主要生产者。胞外酶是水域生态中有机物的降解不可缺少的物质，同样也有利于水产养殖动物的生长。田 黎等[9]研究了芽孢杆菌产生的胞外酶类和多糖，发现其对水生生物具有促进生产和激发产生免疫病害的功能。微生物最主要的作用是对水体水质的改善，它通过一系列物理和化学作用起到改善水质的作用。特别对于高密度养殖的水体，由于养殖密度大、养殖面积有限，所以水体的自净能力非常有限，到了养殖的中后期，常常会因为水质的变坏导致疾病的发生，所以在高密度养殖水体中要定期加入有益微生物来改善水质，减少疾病的发生。如果有益微生物在水体中达到一定的数量，就会形成特定的种群，这样在生存竞争中，有益微生物就会抑制有害微生物的生长，在很大程度上提高水体的质量，使水体保持一个很好的稳定状态。这样对水生动物也是非常有利的，使它们生活在稳定的水环境中，对它们的生长发育非常有利[9]。 　　河蟹养殖区中主要产蛋白水解酶和脂肪水解酶[10]，通过试验研究河蟹养殖环境中的主要菌体和主要胞外酶，为饲用酶制剂的加工和选择提供借鉴和参考，以发挥最大的经济和社会效益。 　　1 材料与方法 　　1.1 试验材料 　　1.1.1 菌种来源。从济宁微山湖河蟹养殖区水体中采集水样并制成菌悬液，进一步梯度稀释，基本培养基过夜培养，挑取单菌落，经过多次纯化培养，得到25株菌。 　　1.1.2 试剂及仪器。琼脂，酵母粉，中性红，酪蛋白，尿素水溶液，豆油，可溶性淀粉，培养皿，三角瓶，高压灭菌锅，显微镜，直尺等。 　　1.1.3 培养基[6]。①LB培养基：蛋白胨10.0 g，酵母粉5.0 g，NaCl 10.0 g，琼脂16.0 g（1.6%），蒸馏水1 000 mL，pH值约7.0。②产蛋白酶菌株鉴定的培养基配方：LB培养基+酪蛋白，含量1.0%。③产淀粉酶菌株的鉴定培养基：可溶性淀粉1.0 g，蛋白胨0.5 g，酵母1.0 g，琼脂1.5 g，蒸馏水100 mL，pH值约7.2。④产脲酶菌株的鉴定培养基：LB培养基+酚红0