橘皮挤出汁对大肠埃希菌抑菌时间的梯度实验.ppt

橘皮挤出汁对大肠埃希菌抑菌时间的梯度实验 报 告 人 ：姚益 指导老 师：邱岳 报告时 间：2014.5.22 研究内容 选题的目的和意义 研究背景 研究的主要内容与预期结果 研究方案 研究的创新点 选题的目的和意义 目的：研究橘皮汁有无抑菌效果及抑菌的持续时间 意义：对柑橘皮中抑菌成分研究，让资源充分利用与环境和谐友好 紧密结合。 1、可作为一种新的植物抗菌资源，为女性用品---卫生棉的天然抗菌 成分的添加提供理论依据（抗菌成分纯天然，无副作用，对女性身体 没有额外伤害，因此天然抗菌卫生棉的研究具有可行性。） 2、作为天然杀菌物质而言，同大蒜等具有抑菌功效的物质相比，橘皮萃取的活性物质的气味更柔和，更容易受到大众的青睐，对皮肤几乎没有刺激作用， 使用范围更广。 3、可以运用橘皮精油，来制作天然杀菌药物，减少纯化学合成药物对人体的副作用，研发绿色普通杀菌剂和防腐剂，防止细菌在长期使用抗生素药物后发生变异，产生抗药性，同时减少一般试剂在使用后残余对环境的污染。 研究背景 　　　橘子酸甜多汁，富含维C而且价廉物美是广受大家喜爱的一种水果。可是吃剩下了的诸多橘子皮常然后我们产生“食之无味，弃之可惜”的感觉。我们能不能把橘子皮也充分利用？充分发掘橘子这一水果黄金的真正价值？我们组从这一角度出发想到既然含有刺激性大蒜具有抗菌作用（刺激性味道来自有机硫化物成分———叫做“硫化丙烯”的辣素），那么刺激性味道相对温和的橘子皮是否具有同样的效果呢？于是我们决定提取橘子皮汁研究其抑菌效果。 研究的主要内容与预期结果 主要内容 1.橘皮汁有无抑菌作用。 2.若有抑菌作用那么抑菌所能持续的时间 预期结果 橘皮汁有一定的抑菌作用。 橘皮汁的浓度越低（放置时间时间越长）抑菌效果越差。 研究方案 一. 材料与方法 1.1 材料与试剂 大肠杆菌( Escherichiacoli )、柑橘、胰蛋白胨、酵母浸粉、 琼脂、葡萄糖(生物试剂) 1.2 仪器与设备 SPX-150B-Z 生化培养箱一台 BC/BD-519H 冰箱一台 酒精灯1个、培养皿4个、烧杯一个、玻璃棒一只、接种环一个、榨汁机一台、 保鲜膜一卷、无菌棉片一袋、镊子一把、标签纸一张 1.3 方法 1.3.1 柑橘皮挤出汁的提取 将适量橘皮放入榨汁机中，10分钟后得到橘皮挤出汁，盛在烧杯中，放入冰箱中冷藏。 1.3.2 柑橘皮挤出汁抑菌时间梯度实验 1.3.2.1 培养基的制备 配制平板计数琼脂培养基，待用。 1.3.2.2 菌悬液的制备 将大肠杆菌活化，制成菌悬液，备用。 1.3.2.3 抑菌时间梯度的制备 用剪子剪取一片（1x1)cm2的棉片，放入刚从冰箱拿出来的橘皮挤出汁中，蘸取液体后，放在保鲜膜上，将保鲜膜绑起来，做成密闭空间，记录时间，并将橘皮挤出汁放入冰箱中。以后每隔一个小时，重复一次上述步骤，直到第8个小时为止。共制备了8个蘸有液体的棉片。 1.3.2.4 棉片扩散法测定抑菌圈 在酒精灯的无菌范围内，用接种环将大肠杆菌悬液均匀涂布于两个固体培养基表面，制成含菌平板。每个个平板平均划分为4个区域，并用标签纸在皿底做好标记，标上0-7八个数字。将已经制备好的蘸有橘皮汁的棉花同时放在相应的培养基区域内，置培养箱中 37℃下培养24h。做2个平行，选取抑菌圈比较明显的平板测定抑菌圈直径，结果取 2次重复实验的平均值。 二.橘皮挤出汁抑菌实验结果分析 抑菌圈的大小 通过测定不同时间的柑橘皮挤出汁对大肠杆菌的抑菌圈直径大小，比较不同时间的橘皮汁对大肠杆菌的抑菌效果，结果见下表。 抗菌素抑菌圈实验结果的判定标准是：抑菌圈直径大于 15mm 时为高度敏感、 10～15mm 时为中度敏感， 7～9mm 时为低度敏感、无抑菌圈者为不敏感。由表可知，随着时间的增加，抑菌圈越来越小，但到第8个小时时仍有抑菌作用。说明橘皮挤出汁的抑菌效果可以持续8个小时以上，抑菌时间比较长。 研究的创新点 以往的实验大多是研究橘皮中各种成分的抑菌效果，而我们设计的实验则是在前辈的基础上上研究橘皮汁的抑菌作用时间，本质上都是抑菌，可是方向不同，应用价值和开发前景也不一样。