生物药物分析与检验 基因工程药物检验_PPT课件.pptVIP

第十一章 基因工程药物检验;基因工程药物与一般药物比较：;③宿主细胞中表达的外源基因，在转录或翻译、工艺放大等过程中，都有可能发生变化。 ;一、基因工程药物质量要求;;1、表达载体和宿主细胞 应提供有关表达载体详细资料，包括基因的来源、克隆和鉴定、表达载体的构建、结构和遗传特性。 ;2、克隆基因的序列 应提供插入基因和表达载体两侧端控制区的核苷酸序列。所有与表达有关的序列均应详细叙述。 ; 3.表达 应详细叙述在生产过程中，启动和控制克隆基因在宿主细胞中的表达所采用的方法及表达水平。;(二)生产的控制;;; 3、连续培养生产 应提供经长期培养后所表达基因的分子完整性资料，以及宿主细胞的表型和基因型特征。 ; 4、纯化 对于收获、分离和纯化的方法应详细记述，应特别注意污染病毒、核酸以及有害抗原性物质的去除。 对整个纯化工艺应进行全面研究，包括能够去除宿主细胞蛋白、核酸、糖、病毒或其它杂质以及在纯化过程中加入的有害的化学物质等。　　 ;(三)最终产品的质量控制;(三)最终产品的质量控制; (1) 氨基酸成分分析 氨基酸成分分析可为目的产物的纯度检定提供信息。 　 完整的氨基酸成份分析结果，应包括甲硫氨酸、半胱氨酸及色氨酸的准确值。氨基酸成份分析结果应为三次分别水解样品测定后的平均值。  ;(2)肽图分析;; (3)重组蛋白质的浓度测定和相对分子质量测定 蛋白质浓度测定方法主要有凯氏定氮法、双缩脲法、染料结合比色法、福林-酚法和紫外光谱法等。 蛋白质相对分子质量测定最常用的方法有凝胶过滤法和SDS法。;(4) 蛋白质二硫键分析 测定方法有: 对氯汞苯甲酸法等 5，5’-二硫基双-2-硝基苯甲酸法 ;2、 纯度分析;(1)目的蛋白质含量测定 测定蛋白质含量的方法可根据目的蛋白质的理化性质和生物学特性来设计。 ①聚丙烯酰胺凝胶电泳 ②高效液相色谱 ;;非蛋白质类杂质：;; 3.生物活性(效价)测定;4.稳定性考察;5、 产品一致性的保证;第三?? 基因工程药物的检验;一、基因工程药物常用几种检验方法;(二)肽图分析法;(三)外源性DNA残留量的测定;(四)宿主细胞蛋白杂质的检测;(五)无菌试验 基因工程药物和其他生物制品不得含有杂菌，灭活疫苗不得含有活的本菌、本毒。在制造过程中应由制造部门按各制品制造及检定规程规定进行无菌试验，分装后的制品须经质量检定部门做最后检定。;(六)内毒素试验 基因工程药物内毒素的检定按照《中国生物制品规程》2000年版的规定进行。 ; (七)异常毒性试验 异常毒性试验是指各制品的特异性毒性试验以外的一般安全试验。目的是通过动物试验检查制品中外源性毒性物质的污染情况以及是否存在意外的不安全因素，以保证人体使用安全。;(八)热原质试验 基因工程药物热原质的检定按照《中国生物制品规程》2000年版的规定进行。 ;(九)生物学活性(效价)检定 各种基因工程药物活性(效价)的检定按照《中国生物制品规程》2000年版的规定进行。