沙眼衣原体有沙眼生物变种、性病淋巴肉芽肿生物变种.ppt

第二十六章 衣原体及检验 衣 原 体 是一类专性细胞内寄生、有独特发育周期、能通过细菌滤器的原核细胞型微生物。归属于广义的细菌范畴。 衣原体科包括沙眼衣原体、肺炎衣原体、鹦鹉热衣原体和家畜衣原体等四种。 一、沙眼衣原体 不仅可致眼部感染，而且可引起生殖泌尿系统感染、性病淋巴肉芽肿以及其他器官疾病。 近年沙眼衣原体的感染率和危害性已超过淋球菌而居性传播疾病之首，因而日益受到医学界的重视。 沙眼衣原体有沙眼生物变种、性病淋巴肉芽肿生物变种（LGV）和鼠生物变种等3个生物变种。 1．沙眼亚种 (1)沙眼： 通过眼-手-眼途径直接或间接密切接触传 播。由A、B、Ba和C血清型引起。结膜引 起局部炎症。有滤泡增生。后期出现瘢痕 及角膜血管翳，影响视力。 (2)包涵体结膜炎： 由B、Ba、D、Da等血清型引起。婴儿通过 产道感染，引起滤泡性结膜炎，不出现角 膜血管翳。 (3)泌尿生殖道感染： 由D-K血清型引起。在性接触传播引起的 非淋菌性泌尿生殖道感染（50％—60％）。 易发展为持续感染或无症状携带者。 2.性病淋巴肉芽肿亚种，由L血清型引起性病淋巴肉芽肿。侵犯腹股沟淋巴结，引起化脓性淋巴结炎和慢性淋巴肉芽肿。 3.鼠生物变种为鼠间传播，不侵犯人，与鼠肺炎有关。 微生物特性 1．发育周期与形态染色 衣原体具有特殊的发育周期。①原体是细胞外存在形式，卵圆形，有胞壁和拟核, 是发育成熟的衣原体，具有高度感染性，能吸附于易感细胞特异受体，增大形成网状体；②网状体或称始体，圆形，二分裂增殖为繁殖型，无感染性。于感染24h后浓缩形成原体，最后细胞破裂释放原体，再感染其他细胞，每个发育周期约需48—72h。 抗原结构 复杂，有属、种、型等特异性抗原。 (1)属特异性抗原：为胞壁LPS，属特异性补 体结合抗原，应用于血清学诊断。 (2)种特异性抗原：位于主要外膜蛋白 （MOMP）上，可用补体结合试验和中和 试验检测。 (3)型特异性抗原：也位于MOMP上，用单 克隆抗体作微量免疫荧光试验能识别沙眼 体的18个型别。 培养特性 沙眼衣原体专性活细胞内寄生，用6—8d龄鸡胚卵黄囊及各种传代细肋培养。一般培养48—72h后可在细胞内查到包涵体及原体和始体颗粒。 近年多采用细胞培养衣原体，常用的细胞株为Hela-299和McCoy。 抵抗力 沙眼衣原体感染材料在37℃条件下，经48h左右即失去活力，56℃6 min灭活。-70℃可保存数年，冷冻干燥可保存30年以上仍有活性。O.1％甲醛或O.5％石炭酸溶液24h杀死沙眼衣原体，2％来苏仅需5min。 红霉素、四环素、强力霉素或青霉素对衣原体有抑制作用。 沙眼和包涵体结膜炎病人，用拭子在结膜上穹窿涂擦或取结膜刮片。性病淋巴肉芽肿：采淋巴结脓汁，也可取直肠拭子或活检材料送检。 用光学显微镜观察包涵体有诊断意义，特别在眼结膜、尿道及子宫颈上皮细胞内发现典型包涵体更有沙眼衣原体感染的参考。 免疫学方法 1)免疫荧光检查：用荧光抗体检测上皮细胞内衣原体抗原。标记抗衣原体LPS抗体，可与所有衣原体反应；而抗MOMP抗体有种、型特异性。可在1h内即作出诊断并可分型。 2)酶免疫检测：能在数小时内检测出衣原体可溶性抗原，并适用于同时检测大量标本。 核酸检测 1)核酸杂交：用125I标记的衣原体rDNA探针检测宫颈标本的敏感性和特异性，与培养相比分别为82.8％和99.4％。 2)PCR：具有高度敏感性和特异性。一般按沙眼衣原体7．5kb质粒、MOMP序列及16SrRNA基因序列设计引物。 分离培养 将标本拭子，用含抗生素的稀释液制成10％-20％悬液。分离的细胞有McCoy、HeLa-229细胞等。置5％CO2下培养。 初代分离培养72-96h后传代或盲传。有症状病人90％标本第1代即可见包涵体，而无症状病人需传代后才得到阳性。 敏感性为80％-90％，特异性100％，是目前确诊最可靠的方法，而且是评价实验室诊断法的标准。 鸡胚培养 有细菌污染的临床标本加适当的抗生素(如链霉素、庆大霉素和制霉菌素等)肉汤，在室温中作用lh后，接种3-4只孵育7天的鸡胚卵黄囊，35℃孵育，观察至13天，收获卵黄囊涂片，作Gimenez染色，镜检原体。 鉴定 1.将细胞培养盖片用Giemsa或碘染色镜检胞质内包涵体。Giemsa染色比碘染色敏感，可作为鉴别沙眼衣原体的参考。 2.可用型特异性荧光血清鉴定其型别。对于卵黄囊和小鼠分离的材料可用免疫荧光法鉴定原体或补体结合抗原 。 抗体检测 目前检测抗体的血清学方法在常规临床诊断中价值很小。