磺胺类总量ELIA检测试剂盒说明书.doc

磺胺类总量ELISA检测试剂盒说明书 一、概要 本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点，操作时间仅需1.5小时，能最大限度地减少工作强度和操作误差。 二、试验原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物磺胺间甲氧嘧啶、磺胺嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺噻唑与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗三者的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含磺胺类药物的含量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中磺胺类药物的残留量。 三、适用范围 可定性、定量检测动物组织（肌肉/肝脏/鱼/虾）、鸡蛋、蜂蜜、牛奶、血清等样品中磺胺间甲氧嘧啶（SMM）、磺胺嘧啶（SD或SDZ）、磺胺甲噁唑（SMZ）、磺胺噻唑（ST）药物的残留量。 四、交叉反应率 磺胺嘧啶（SD或SDZ）…………………………… 100.0% 磺胺间甲氧嘧啶/磺胺六甲氧嘧啶（SMM）…… 98% 磺胺甲噁唑（SMZ）………………………………… 120.0% 磺胺噻唑（ST）……………………………………… 98.0% 酞酰磺噻唑（PST）………………………………… 62.8% 磺胺甲噻二唑…………………………………… 103% 磺胺吡啶…………………………………………… 51.9% 磺胺对甲氧嘧啶…………………………… 35% 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅旋转蒸发仪/氮气吹干装置 ┅┅均质器振荡器、洗耳球、容量瓶：500ml ┅┅涡旋仪、离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅玻璃试管：15ml ┅┅聚苯乙烯离心管：50ml ┅┅玻璃离心管：10ml ┅┅微量移液器：单道 20ml～200ml、200ml～1000ml 多道 250ml 试剂： ----乙腈(分析纯)（动物组织专用） ----乙酸乙酯(分析纯) ----正己烷(分析纯) ----十二水合磷酸氢二钠(分析纯) ----二水合磷酸二氢钠(分析纯) ----氢氧化钠(分析纯) ----浓盐酸 ----去离子水 六、提供的材料与试剂 1、96孔酶标板×1块（包被有偶联抗原） 2、标准液×6瓶：（1ml/瓶） 0ppb，2ppb，4ppb，8ppb，16ppb，32ppb 3、高浓度标准品：（1ml/瓶） 1ppm 4、酶标二抗 12ml …………………… 红色帽 5、抗体工作液 10ml …………………… 绿色帽 6、底物液 A 液 7ml …………………… 白色帽 7、底物液 B 液 7ml …………………… 红色帽 8、终 止 液 7ml …………………… 黄色帽 9、20×浓缩洗涤液 40ml……………………… 透明帽 10、20×浓缩提取液 50ml……………………… 蓝色帽 七、溶液的配制 配液1: 0.02M磷酸盐缓冲液 称取5.36g十二水合磷酸氢二钠、0.2g二水合磷酸二氢钾、8g氯化钠和0.2g氯化钾加去离子水溶解定容至1L 配液2: 0.5 M盐酸溶液 量取41.7ml浓盐酸加去离子水定容至500ml 配液3: 0.2 M 氢氧化钠 称取4g氢氧化钠加去离子水定容至500ml 配液4: 提取工作液 用去离子水将20×浓缩提取液按1：19体积比进行稀释（1份20×浓缩提取液+19份去离子水）用于样本的提取，提取工作液在4℃环境可保存一个月。 配液5: 洗涤工作液 用去离子水将20×浓缩洗涤液按1：19体积比进行稀释（或按需量稀释）（1份20×浓缩洗涤液+19份去离子水）用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。 八、样本前处理步骤 样本处理前须知 处理任何样本时，都必须注意： （a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果 （c）所有样本复溶后均不能保存 (一) 高检测限样本 （a ）动物组织（鸡肉、鸡肝、猪肉、猪肝、鸡蛋） ┅┅用均质器均质组织样本； ┅┅称取2.0±0.05g均质物至50ml聚苯乙烯离心管中，加入8ml乙腈，立即用振荡器振荡20min，3000g以上离心5min； ┅┅取上清液2ml至10ml干净的玻璃试管中，于50～60℃水浴氮气流下吹干； ┅┅加入1ml正己烷用涡旋仪涡动20s溶解干燥残留物，加入1ml 0.02 M磷酸盐缓冲液（见配液1），用涡旋仪涡动1m