HPLC测定覆盆子中鞣花酸、黄酮和覆盆子苷―F5含量.docVIP

HPLC测定覆盆子中鞣花酸、黄酮和覆盆子苷―F5含量 　　[摘要]该研究建立了HPLC-UV同时测定覆盆子药材中鞣花酸、异槲皮苷、山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷、椴树苷和山柰酚含量以及HPLC-ELSD测定覆盆子苷-F5含量的方法。实验结果表明，各化合物的标准曲线线性关系良好（R2 0.999 5），检测限为0.297～90.144 ng，定量限为0.990～300.480 ng，加样回收率为97.11%～101.7%（RSD≤2.1%）。不同产地覆盆子药材中各化合物的含量差异较大，其中鞣花酸的产量与纬度呈正相关，总黄酮含量在东部产地药材中较高，且覆盆子苷-F5含量在安徽亳州药材中最高。该研究建立的方法简便、准确、灵敏、重复性好，为覆盆子药材的进一步研究开发，品质评价和质量控制提供了科学依据。 　　[关键字]覆盆子；含量测定；鞣花酸；黄酮；覆盆子苷-F5 　　[收稿日期]2013-06-06 　　[通信作者]* 郭美丽，Tel/Fax：（021 E-mail： mlguo@126.com 　　[作者简介]何建明，硕士研究生，E-mail： hejianmingaaa@163.com中药覆盆子（Rubi Fructus）为蔷薇科悬钩子属植物掌叶覆盆子Rubus chingii Hu的干燥未成熟果实，具有益肾、固精、缩尿之功效，用于肾虚遗尿、小便频数、阳痿早泄、遗精滑精等[1]。现代研究表明，覆盆子主要成分有鞣质、萜类、黄酮等，药理作用主要有抗诱变作用，改善学习记忆能力，延缓衰老，增强免疫，对性腺轴有调控作用等[2]。鞣花酸为覆盆子中鞣质的主要成分，具有良好的抗炎、抗诱变和抗菌作用等[3-5]。异槲皮苷，山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷，椴树苷和山柰酚为覆盆子中黄酮类的主要成分，药理学研究表明，其均具有抗氧化，抗炎等作用[6-9]。覆盆子的化学成分研究已经发现7个半日花烷型二萜苷，其主要成分为覆盆子苷-F5。目前《中国药典》2010年版对覆盆子药材的质量控制方法尚不完善，还没有定量检测的方法和指标。本文以鞣花酸、异槲皮苷，山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷，椴树苷，山柰酚和覆盆子苷-F5为指标，建立了HPLC同时测定其含量的方法，并对不同产地覆盆子样品进行了含量测定，旨在为覆盆子的资源开发以及质量评价和控制提供科学依据。 　　1材料 　　安捷伦1100系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；SEDEX 85型蒸发光散??检测器（法国SEDERE公司）；SB 25-12DTD超声清洗器机（宁波新芝生物科技有限公司）；TL-5.0W台式离心机（上海离心机械研究所）；METTLER AE 240 1/10 万电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）。乙腈为色谱纯（杰帝贝柯化工产品贸易（上海）有限公司），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯（国药集团化学试剂有限公司），鞣花酸（批纯度为98.8%）购于上海同田生物技术有限公司，异槲皮苷（批号111809-201001，纯度为99.5%）购于中国食品药品检定研究院，山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷、椴树苷、山柰酚和覆盆子苷-F5均由本实验室分离纯化得到，其结构经波谱鉴定，数据与文献报道一致[10-12]，HPLC检测纯度均大于99.5%。 　　覆盆子未成熟果实分别采摘于浙江馨昌、贵州遵义、安徽亳州等16个产地，均为由绿变绿黄时采摘、60℃干燥，经第二军医大学药学院郭美丽教授鉴定为掌叶覆盆子R. chingi的干燥未成熟果实。 　　2方法与结果 　　2.1对照品溶液的制备分别精密称取真空干燥至恒重的鞣花酸（20.56 mg），异槲皮苷（2.04 mg），山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷（5.23 mg），椴树苷（3.96 mg），山柰酚（2.04 mg）置于50 mL量瓶中，称取真空干燥至恒重的覆盆子苷-F5（6.26 mg）于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，经 0.45 μm 微孔滤膜过滤，即得鞣花酸质量浓度为0.411 2 g?L-1，异槲皮苷0.040 8 g?L-1，山柰酚-3-O-β-D-芸香糖苷0.1046 g?L-1，椴树苷0.079 2 g?L-1，山柰酚0.040 8 g?L-1的混合对照品溶液和质量浓度为0.250 4 g?L-1的覆盆子苷-F5对照品溶液。 　　2.2供试品溶液的制备不同产地掌叶覆盆子的干燥未成熟果实，置电热恒温鼓风干燥箱中60 ℃ 干燥至恒重，研细，过40目筛，精密称取2.50 g置于具有塞锥形瓶中，精密加入50 mL 70%甲醇，超声30 min，3 000 r?min-1离心10 min，移除上清液，再重复上述操作1次，合并上清液，减压浓缩，移至50 mL量瓶，70%甲醇稀