传统霍恩氏计算LD50替代方法概述.pptVIP

急性经口毒性测定方法调研 GB 15670-1995 (2018-2-1 废止) GB 15670-2017 (2018-2-1 实施) 文献 霍恩氏法 机率单位-对数图解法 寇氏法 GB 15670-1995 (2018-2-1 废止) GB 15670-2017 (2018-2-1 实施) 序贯法 替代方法概述 文献 上下增减剂量法 固定剂量法 毒性等级法 固定浓度试验法 霍恩氏法 概率单位法 霍恩氏法 机率单位-对数图解法 寇氏法 在应用时必须满足 3个条件: ①反应量大致呈正态分布,即最低被度出现反应率 0% (Pn=0) ,最高浓度出現反应率l00% (Pm= 1) ; ②浓度必须按等比级数分布; ③各组动物数相等。 虽有条件限制，但此法简便有敏、易于掌握, 因此仍是最常用的LC50计算方法之一。 上下增减剂量法 1、背景 上下增减剂量法(Up-and-Down Procedure, UDP)由Dixon和Mood于1948年首次提出。 1985年Bruce进行了改进。 OECD最早于1998年采用UDP，期间几经更新并于2006年更新列为指南TG425。 2008年我国采用该方法为国家标准(GB/T 21826-2008)。 2、实验原理 限度试验分为2000和5000mg/kg两个剂量水平,最多仅用5只动物。 主试验是一个预先设计的染毒程序, 每次染毒1只动物, 由第1只动物染毒后的反应决定第2个动物接受化学物的剂量, 若动物存活, 第2只动物给予高一级剂量,若第1只动物死亡或出现濒死状态, 第2只动物给予低一级剂量。在对每只染毒动物仔细观察48h后, 可以决定是否对下1只动物染毒以及确定染毒剂量。当满足停止试验的标准时可以结束试验。根据终止时所有动物的状态, 用最大可能性法计算LD50值。实验需要选择一个比较合适的剂量范围, 使得大部分的动物所接受的化学物剂量都会在真正的平均致死剂量左右。如果剂量范围过大, 则需要有更多的动物来进行观察。 大大减少实验动物的使用，不但可以进行毒性表现的观察，还可以估算LD50及其可信限。 适用于动物染毒后1d~2d内死亡的受试物，对预期染毒死亡延迟至5d以上(含5d)的受试物不适用。 固定剂量法 1、背景 固定剂量法(fixed dose procedure, FDP),英国毒理学会于1984 年正式提出。 OECD于1992年采用了FDP，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1bis, OECD 于2001年作为指南TG420。 2008年我国采用该方法为国家标准。 2、原理 使用一组固定的剂量( 5, 50, 500或2000 mg/kg), 分预试验与主试验两个阶段进行。 预试验采用单性别1只动物循序进行, 一般用雌性, 除非有资料和指征提示雄性更敏感。如受试剂量无中毒表现, 而高一档剂量有动物死亡, 则需在其间插入剂量。 主试验根据预试验结果, 一般只需一个剂量, 雄雌动物各5 只。观察出现“明显毒性”, 实验终止; 不出现中毒表现, 需提高一档剂量试验; 出现死亡, 需降低一档剂量试验; 如2000 mg/kg预试验和主试验都不出现中毒体征, 试验终止。结果以不出现与受试化学物相关死亡的最高剂量表示。 固定剂量法设固定剂量以观察动物的试验反应, 观察指标是“明显毒性” ( clear sign on toxicity ) , 不以死亡为依据, 而是按毒性症状来判断受试物质的毒性, 故结果不是具体的LD50 值。 结果判定分为高毒、有毒、有害和毒性未分类等。 毒性等级法 1、背景 毒性等级法(Acute toxic class method)最初由Samiey 于1990 年提出, 用于危害评估危害分类以及危险度评价, 它是以动物死亡作为实验终点的分阶段试验法。OECD于1992年采用了ATC，2001年更新列为指南TG423，欧盟指令67/548/EEC附录V列为B.1tris。 2、原理 该法每次只选用3 个设定剂量( 25, 200, 2000 mg/kg) 之一, 单性别3 只动物进行试验, 根据上一个步骤有无死亡以及死亡的动物数, 决定下一步的试验。根据预先设计好的判别表格进行毒性分级。有3 种可能的结局: (1)无需进一步试验即可分级；(2)同一剂量水平再做3只动物； (3)在高一级或低一级剂量水平另做3只动物。 ATC不能用以精确估计LD50的值, LD50的值可以根据提供的数据使用最大相似法进行计算。 该方法同样也适用于对LD50的置信限, 死亡剂量反应曲线及其置信限的估计。 分类法能够发展并成为监管机构认可的方法一方面是因为它有较高的正确率, 另一方面则是它的操作在实际应用中足够简便。 固定浓度试验法