HPLC测定藏药风毛菊中茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯含量.docVIP

HPLC测定藏药风毛菊中茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯含量 　　[摘要] 该文建立了HPLC同时测定藏药风毛菊中茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯3种香豆素类成分含量的方法。采用Wondasil C18-WR色谱柱（4.6 mm×250 mm， 5 μm），以甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL?min-1；检测波长325 nm；进样量10 μL；柱温35 ℃。结果茵芋苷，东莨菪苷和伞形花内酯在40 min内均达到基线分离，各成分在其线性范围内均呈现良好的线性关系，线性范围分别为0.18～5.6 μg（r=1.000 0），0.060～1.8 μg（r=0.999 9），0.032～0.97 μg（r=0.999 8）。平均加样回收率分别为99.16%（RSD 0.41%），100.3%（RSD 0.79%），102.2%（RSD 0.87%）。该方法操作简便，准确，重复性和稳定性较好，可作为藏药风毛菊的质量评价提供科学依据。 　　[关键词] 藏药；风毛菊；HPLC；含量测定；质量控制 　　藏药风毛菊为菊科植物长毛风毛菊Saussurea hieracioides Hook. f.或美丽风毛菊S. pulchra Lipsch. 的干燥地上部分，始载于藏医名著《月王药诊》[1]，为藏族习用药材，具有渗湿利尿，引泻腹水的功效，主要用于水肿，腹水，膀胱炎，小便不利等[2-3]。藏药风毛菊的资源和化学分离方面的研究已有报道，主要含有茵芋苷、东莨菪苷、伞形花内酯、东莨菪内酯等香豆素类成分，以及黄酮类，木质素类等化合物[4-6]。现代药理研究表明，香豆素类成分对淋巴性水肿，肾功能不全所致的肾炎等方面具有较好的效果[7-10]，为藏药风毛菊主要活性成分，但目前还未见有关测定藏药风毛菊中香豆素类成分的报道。据此，本文运用HPLC对不同产地的藏药风毛菊中茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯3种香豆素类成分进行定量分析。 　　1 材料 　　Agilent 1260高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；CQ-250超声波清洗器（上海必能信超声有限公司）；BP211D电子天平（1/10万，德国Sartorius公司）。伞形花内酯对照品（供含量测定用，批号111739-200501，纯度≥98%）购自中国食品药品检定研究院；茵芋苷对照品（供含量测定用，批号Y-174-120823，纯度≥98%），东莨菪苷对照品（供含量测定用，批号D-062-120831，纯度≥98%）均购自成都瑞芬思生物科技有限公司。甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析???。 　　共收集了藏药风毛菊样品15批，经成都中医药大学民族医药学院张艺研究员鉴定均为菊科植物长毛风毛菊S. hieracioides的干燥全草，详细信息见表1。 　　2 方法与结果 　　2.1 色谱条件 Wondasil C18-WR色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液（B），梯度洗脱，0～40 min，20%～30% A；40～45 min，30%～100% A；45～55 min，100% A。流速1.0 mL?min-1；检测波长325 nm；进样量10 μL；柱温35 ℃。在上述色谱条件下3种成分与相邻色谱峰之间得到很好的分离，分离度均大于1.5，理论塔板数均大于5 000。色谱图见图1。 　　2.2 对照品溶液的制备 取茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯对照品适量，精密称定，加80%甲醇溶解制成质量浓度为茵芋苷0.18 g?L-1，东莨菪苷0.06 g?L-1，伞形花内酯0.03 g?L-1的混合对照品溶液。 　　2.3 供试品溶液的制备 取样品粉末0.5 g，精密称定，置150 mL锥形瓶中，加80%甲醇50 mL，80 ℃回流提取40 min，冷却后称重，补足失重；摇匀，滤过，滤液过0.45 μm微孔滤膜，即得。 　　2.4 线性关系考察 分别精密吸取混合对照品溶液1，5，10，15，20，25，30 μL，注入高效液相色谱仪，按2.1项下色谱条件测定茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯峰面积，以各成分色谱峰面积值为纵坐标（Y），进样量为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程，见表2。 　　2.5 精密度试验 精密吸取同一混合对照品溶液10 μL，按上述色谱条件，连续进样6次，测得茵芋苷峰面积的RSD为0.63%；东莨菪苷峰面积的RSD为0.65%；伞形花内酯峰面积的RSD为0.51%，说明本法有良好的精密度。 　　2.6 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0，2，4，8，12，24 h进行测定，进样量10 μL，记录峰面积，计算3种成分的峰面积RSD。结果茵芋苷、东莨菪苷和伞形花内酯的RSD分别为0.59