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1）快检卡—胶体金免疫层析法 胶体金法检测原理 操作简便、快速 可实现现场筛查 灵敏度较低，其无法给出准确的定量结果 均一性较差，易出现假阳性和假阴性 二、呕吐毒素检验方法讨论 1）快检卡—荧光定量法 荧光定量法检测原理 二、呕吐毒素检验方法讨论 1）快检卡——荧光定量法 荧光定量法检测原理 操作简便、快速 可实现现场筛查 灵敏度略低，均一性略差 二、呕吐毒素检验方法讨论 2）酶联免疫分析方法 酶联免疫（ELISA）法检测原理 灵敏度较高、线性范围较宽 结果相对比较准确，能给出定量结果 操作相对繁琐，检测时间较长 实验结果的重复性与操作人员的熟练程度密切相关 一次检测样本量要求比较多，不能随到随检 二、呕吐毒素检验方法讨论 性能指标 酶联免疫法 快检卡 色谱法 能否定量 是 是 是 灵敏度 高 低 中 准确度 中 低 高 重复性 中 低 高 检测时间 ≥1H ≤10min ≥30min 操作简易程度 繁琐 简便 繁琐 是否需要 专业检验人员 是 否 是 检验成本 中 低 贵 4）不同方法学性能对比 二、呕吐毒素检验方法讨论 5）工厂检验方法介绍——酶联免疫法 二、呕吐毒素检验方法讨论 1、样品制备 粉碎并取5.0g有代表性的样本置入100mL具塞三角瓶中，加入25mL去离子水与其混合；于振荡器上剧烈振荡10分钟，转速为150r/min；取液体于4000r/min离心5min(或静置3min，再用定量滤纸过滤)；取上清或滤液1mL，再加入4mL去离子水，振荡5S或手摇匀, 取50μL进行分析。 2、检测步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20~25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、 加标准品/样本：加标准品/样本50μL/孔到对应的微孔中，再加入呕吐毒素酶标物50μL/孔，最后加入呕吐毒素抗试剂50μL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反应30min。 5）工厂检验方法介绍——酶联免疫法 二、呕吐毒素检验方法讨论 3、洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤液250μL/孔，充分洗涤4~5次，每次间隔10s，用吸水纸拍干（拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破）。 4、显色：加入底物液A液50μL/孔， 再加底物液B液50μL/孔，轻轻振荡混匀， 用盖板膜盖板后置25℃避光环境反应15min。 5、测定：加入终止液50μL/孔，轻轻 振荡混匀，设定酶标仪于450nm处（建议 用双波长450/630nm检测，请在5min内读 完数据），测定每孔OD值。 5）工厂检验方法介绍——HPLC 二、呕吐毒素检验方法讨论 1、样品制备 准确称取5.0g粉碎的样品，加入5g聚乙二醇8000，并与25mL水混合，以均质器高速搅拌提取2min或振荡提取30min，用快速定性滤纸过滤， 并用玻璃微纤维滤纸过滤，至滤液澄清，备用。 2、亲和柱净化 3mL柱管去掉上方塞子，安装上转接头，将转接头另一端与20mL针筒固定后使用；将1mL柱管上方堵头取出后斜剪断，再插回柱子上。 准确移取上述滤液，注入针筒中，调节针筒压力使其以1滴/2秒的速度缓慢通过免疫亲和柱；用20mL 水冲洗柱子，流速1滴/秒，弃去流出液，直至2~3mL空气过柱体，保证柱子内没有残余液体； 准确加入1.0mL色谱级甲醇洗脱，流速自然重力，直至2~3mL空气通过柱体，保证柱子内没有残余液体。 二、呕吐毒素检验方法讨论 收集全部洗脱液，进行相关测定。 注意：整个纯化过程尽量不要让柱子干燥！ 3）检测：将洗脱液氮气挥干，1.0mL流动相定容，进液相检测，参考GB/T 23503-2009或GB/T 30956-2014色谱条件。 —谢 谢— — * * * * 2017年4月 2017年度首次交流会 目录 * 1、手洗法 一、面筋检测方法讨论 步骤：1） 称量：称量待测样品10g，准确至0.01g，置于100ml烧杯中，记录为m1。 2） 面团制备和静置：用玻璃棒不停搅动样品的同时，用移液管一滴一滴的加入4.6ml～5.2ml氯化钠溶液（2%浓度）。拌合混合物，使其形成球状面团，注意避免造成样品损失，同时粘附在器皿璧上或玻璃棒上的残余面团也应收到面团球上。注意：面团样品制备时间不能超过3min。 3）洗涤：将面团放在手掌中心，用容器中的氯化钠溶液以每分钟约50ml的流量洗涤8min，同时用另一只手的拇指不停地揉搓面团。将已经形成的面筋球继续用