现代仪器析——毛细管电泳.ppt

高效毛细管电泳capillary electrophoresis ，CE 目录 概述 毛细管电泳原理 应用 毛细管电泳仪 电泳：在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象。由于不同离子所带电荷及性质的不同，迁移速率不同，可实现分离。 高效毛细管电泳：是近年来发展最快的分析方法之一。是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离分析的液相分离方法。 一、概述 一、概述 CE是经典电泳技术和现代微柱分离技术相结合的产物。 毛细管电泳（CE）和传统电泳的根本区别在于前者设法使电泳过程在散热效率极高的毛细管内进行，从而确保引入高的电场强度，全面改善分离质量。 柱效高，可达105～106/m 分离速度快，几十秒～几十分钟 溶剂和试样消耗极少 没有高压泵，仪器成本比HPLC更低 选择性强 特点 毛细管电泳的分类 按分离模式分类，常用的ＣＥ技术有六种： 毛细管区带电泳，胶束电动毛细管色谱， 毛细管凝胶电泳，毛细管等电聚焦， 毛细管等速电泳 ，毛细管电色谱 毛细管区带电泳是CE中最基本、应用最普遍的一种模式。 二、毛细管电泳原理 在电解质溶液中，带电粒子在电场作用下，以不同的速度向其所带电荷相反方向迁移，产生泳流。 CE所用的石英毛细管柱，在pH3时，石英毛细管壁上的硅醇基(—SiOH）在水溶液中发生电离，产生的SiOˉ负离子使毛细管壁内表面带负电，和溶液接触时相应的缓冲液带正电，形成了双电层。 在高电压作用下，双电层中的水合阳离子引起流体整体朝负极方向移动，该现象称为电渗现象，并形成电渗流（electro-osmotic flow, EOF） 图4 毛细管电泳的电渗现象和电渗流 粒子在电解质溶液中的迁移速度等于电泳（Vep）和电渗流（Veo）两种速度的矢量和,即 V=Vep+Veo=(μep + μeo ) · E 分离原理 正离子的运动方向和电渗流一致，故最先流出； 中性粒子的电泳速度为0，故其迁移速度相当于电渗流速度； 负离子的运动方向和电渗流方向相反，但因电渗流速度一般都大于电泳流速度，故它将在中性粒子之后流出。 即，阳离子中性分子阴离子 这样，各种粒子因迁移速度不同而实现了分离。 图 CE中各种离电荷粒子分离示意 ①电渗流具有像HPLC中泵一样的作用，推动离子前进，加上不同离子电泳速度和方向的差异，完成阳离子、阴离子和中性离子的分离。 ②改变电渗流的大小和方向，可以改变分离效率和选择性，这是HPCE中优化分离的重要因素。 电渗流在CE 的分离中起着如下极其重要的作用： ③电渗流的微小变化影响分离结果的重现性（迁移时间和峰面积）。 电泳中影响电渗流的因素很多，应设法控制电渗流的恒定。 三、毛细管电泳仪 CE 设备的基本装置包括： 高压直流电源； 毛细管； 两个供毛细管两端插入而又可和电源相连的缓冲液贮瓶； 检测器； 数据处理系统 主要部件 高压电源 （1）0～30 kV 稳定、连续可调的直流电源； （2）具有恒压、恒流、恒功率输出； （3）电场强度程序控制系统； （4）电压稳定性：0.1%； （5）电源极性易转换； 毛细管柱 （1）材料：石英：各项性能好；玻璃：光学、机械性能差； （2）规格：内径20～75μm，外径350～400μm；长度=1m 检测器 要求：具有极高灵敏度；可柱端检测； 紫外-可见光分光检测、激光诱导荧光检测、电化学检测和质谱检测均可用作毛细管电泳的检测器，其中以紫外-可见光分光光度检测器应用最广。 进样系统 常用的进样方式是电动进样和压力进样。 1）离子分析 阳离子分析： 迁移方向和电渗流方向一致； 四、应用 阴离子分析 阴离子电泳方向和电渗流方向相反、速度接近，分析时间长、效率低； 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析； 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段； 采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物。 2）药物分析 合成获得单一手性化合物困难； 检测分析非常困难； HPCE分离分析手性化合物的方法：加入手性选择剂； 根据形成配合物的稳定常数有差异进行分离和检测。 3）手性化合物分析 采用毛细管胶束电动色谱（MECC）模式，在25分钟内可以分离了23种氨基酸； HPCE可取代传统的氨基酸分析仪。 4）氨基酸与蛋白质分析 Thank you ! 汇报结束，欢迎指导。