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不同生境对植物叶绿素a、b影响的测定 郭立彬 (隆尧县第二中学 河北隆尧055352 摘 要 叶绿素是叶绿体中最重要的色素，是叶绿酸的酯，主要含有叶绿素a和叶绿素b，它们不溶于水，但能溶于酒精、丙酮等有机溶剂，因此可以通过实验用丙酮液提取叶绿素并对其进行含量测定。同一种植物生长的环境对其叶绿素的合成有不同程度的影响，采集不同生境下的植物进行实验，测定其叶绿素的含量，从而验证不同生境对叶绿素的影响。 关键词 叶绿素 , 叶绿素含量 , 不同生境 , 大叶黄杨 高等植物的光合色素有两类：叶绿素和胡萝卜素。叶绿素主要含有叶绿素a和叶绿素b。叶绿素a和叶绿素b的吸收光谱很相似，但略有不同，其最大吸收峰不同（叶绿素a的最大吸收峰在663nm，叶绿素b的最大吸收峰在645nm），吸收曲线彼此重叠。因为在混合液中两个组分的光谱吸收峰有明显差异，但吸收曲线彼此有些重叠的情况下，要分别测定两个组分，可根据Lamber_Beer 定律，通过代数方法，计算一种组分存在时对光密度的影响，从而分别得到两种组分的含量，所以据此可以测得叶绿素提取液中叶绿素a和叶绿素b的含量及总叶绿素的含量。根据Lamber-eer定律，最大吸收光谱峰不同的两个组分的混合液，它们的浓度C与光密度OD之间有如下关系：OD1=Ca 从文献中可以查到叶绿素a 和叶绿素b的80%丙酮溶液，当浓度为1g/L时的比吸收系数K值，代入上面两式中，整理变换后可得： 式中的C1为总叶绿素浓度，单位为mg/L。利用上面的（1）、（2）、（3）式即可计算出叶绿素a和叶绿素b及总叶绿素的浓度，再根据稀释倍数分别计算每克叶片中叶绿素的含量（mg/g鲜重）。在校园内采集不同生境下的植物，分别对其进行叶绿素含量的测定，比较所得数据，可知不同生长环境下的植物合成叶绿素的能力不同，对叶绿素a和叶绿素b的合成影响亦各不相同。 1 材料和仪器 1.1 材料：丙酮 碳酸钙 石英沙 大叶黄杨不同生境下的叶片 蒸馏水 1.2 仪器：723型分光光度计 扭力天平 剪刀 研钵 移液管 试管 量筒 胶头滴管 烧杯 镊子 实验步骤 2.1 色素提取：取新鲜叶片，剪去粗大的叶脉并剪成碎块，称取0.5g，放入研钵中加蒸馏水5-6ml、少许碳酸钙和石英沙，研磨成匀浆，移入量筒中，定容至10ml，振荡摇匀，用移液管从中吸取2ml，放入试管中再加入8ml丙酮，用力振荡，静置，得叶绿素a、b的丙酮溶液，用同样的方法获得其他生境下植物叶片的叶绿素的丙酮溶液。 2.2 测定光密度 待试管中沉淀中所含的叶绿素完全溶于丙酮液后，取上清液1ml，加入比色杯中，以80%的丙酮液为对照，分别测定663nm与645nm处的光密度值。 结果与分析 运用分光光度计测定光密度值，得数据组如表格一所示： 不同生境的大叶黄杨 OD645 OD663 南植物园树阴下 0.209 0.465 校内大门口东侧 0.338 0.524 校外大门口西侧 0.195 0.446 植物园东侧小树下 0.194 0.390 3.2 提取液中叶绿素浓度的计算：将所测得的表一中的数据代入公式（1）、（2）、（3）中计算出叶绿素提取液中叶绿素a和叶绿素b及总叶绿素的含量（mg/g鲜重），见表格二： 不同生境的大叶黄杨 Ca Cb Ct 南植物园树阴下 5.34329 2.6099 7.95319 校内大门口东侧 5.74558 5.28788 11.03346 校外大门口西侧 5.13965 2.37822 7.51787 植物园东侧小树下 4.43114 2.6174 7.04854 3.3 叶片中色素含量的测定：根据稀释倍数可分别计算每克鲜重叶片中色素的含量（N：mg/g鲜重）N=C*（10/1000）*（1/0.05）=0.2C 代入表格二中的数据，计算结果，见表格三： 不同生境的大叶黄杨 Na Nb Nt 南植物园树阴下 1.068658 0.52198 1.590638 校内大门口东侧 1.149116 1.057576 2.206692 校外大门口西侧 1.02793 0.475644 1.503574 植物园东侧小树下 0.886228 0.52348 1.409708 3.4 比较实验结果：观察上面三个表格，可以发现不同生长环境下的同一种植物叶片中叶绿素的含量个不相同，说明不同生境对叶绿素的合成有不同的影响。 3.5 结果分析 不同生境对叶绿素的合成影响不同，影响其合成的因素有光照、温度、矿质元素等。 3.4.1 光照对叶绿素合成的影响：植物体内由原脱植基叶绿素到叶绿素的形成过程许经过光照后才能顺利完成，如果没