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超微粉体夏天无指纹图谱研究 　　【摘要】目的建立夏天无超微粉体的HPLC指纹图谱，为夏天无的质量控制提供可靠方法。方法采用梯度洗脱进行色谱分离，固定相为diamonsil BDS C18（5μm，250mm×4.6mm），流动相为流动相：A乙腈-B水（每1000mL水中加入冰乙酸30mL，三乙胺8mL），柱温25℃，流速：0.8mL/min；检测波长280nm。结果初步建立了夏天无超微粉体的HPLC指纹图谱，标定了11个共有峰。结论建立的指纹图谱可以较好地反映夏天无超微粉体的内在质量。 　　【关键词】夏天无；超微粉体；HPLC指纹图谱 　　夏天无为罂粟科植物伏生紫堇 Corydalis decumbens（Thunb）Pers.的干燥块茎。主产于江西，在湖南、浙江、江苏等地。为民间常用药材，具有活血、祛瘀、通络、行气等功效，用于中风偏瘫、半身不遂等的治疗。夏天无主要有效成分为生物碱类，2010年版《中国药典》将原阿片碱（Pro），盐酸巴马汀（Pal）作为其定性和定量指标。但这些成分存在于罂粟科的多种植物中，并非夏天无特有成分，而且仅采用一种或两种成分对药材进行定性与定量，不能全面的反映其内在质量。本文采用HPLC法，对夏天无药材进行了HPLC指纹图谱研究，建立了一种能较全面地反映药材质量，并进行质量控制的方法。 　　1仪器与试药 　　Agilent 1200 HPLC（四元泵，自动进样器，紫外检测器）；Agilent Technologies 1200 Compact LC化学工作站；BFM-T6BI型贝利微粉机（济南倍力粉体技术工程有限公司）。 　　甲醇、乙腈（色谱纯，Tedia公司生产），冰乙酸（色谱纯，天津光复精细化工研究所），其它均为分析纯，水为超纯水。 　　原阿片碱（批号：110853-200402）?延胡索乙素（批号：110726-201011）?盐酸巴马汀（批号：110732-200907）均由中国药品生物制品检定所提供。 　　夏天无药材共10批（分别购买与湖南、江西等地，经湖南省中药研究所鉴定均为罂粟科植物伏生紫堇夏天无Coydalis decumbens（Thunb.）Pers.的干燥块茎。样品来源见表1。 　　2.2混合对照品配制取原阿片碱对照品10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加1%盐酸溶液5mL使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。取盐酸巴马汀对照品10mg，精密称定，置100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取延胡索乙素对照???10mg，精密称定，置50mL量瓶中，加1%盐酸溶液5mL使溶解，再加甲醇至刻度，摇匀。精密量取上述三种溶液各5mL，置同一25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1mL含原阿片碱40μg、延胡索乙素40μg、盐酸巴马汀20μg）。 　　2.3超微粉体样品的制备[3-4]称取夏天无粗粉200g于贝利粉碎机中，在最佳工艺条件下，进行超微粉碎18分钟，即得夏天无超微粉体。粒径分布为0.567-153.943μm，D50[5]≤9.684μm，≤75μm的颗粒累积在98%以上。 　　2.4供试品溶液的制备取不同产地及市售10批夏天无超微粉1.0g，精密称定，置100mL三角锥形瓶中，加入甲醇50mL，精密称定重量，加热回流1小时，放冷后补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液过微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。 　　3指纹图谱方法学考察 　　精密度试验：精密吸取同一供试品溶液（NO.2，江西2）10μL，按以上色谱条件连续进样6次，记录色谱图，计算其各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于1.6%，表明仪器精密度好。 　　重复性试验：取夏天无超微粉（NO.2，江西2）6份，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按拟定方法进样，记录色谱图，计算其各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于1.6%，表明该实验方法重复性较好。 　　稳定性试验：精密吸取同一供试液（NO.2，江西2）10μL，分别在0，6，12，24，48h进样，记录色谱图，计算其各共有峰的相对保留时间及相对峰面积的RSD均小于1.7%，表明供试品溶液在48小时内测定稳定。 　　3.1混合对照与样品HPLC图谱测定分别精密吸取混合对照与供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测定，记录75分钟的色谱图。混合对照色谱见图1，供试品色谱见图2。 　　3.2指纹图谱的建立[5] 　　3.2.1共有指纹峰的标定[6]采用相对保留时间标定共有指纹峰，以图谱中原阿片碱色谱峰为参照物S峰，将各色谱峰保留时间与同一图谱中参照物的保留时间比较，其比值为各色谱峰的相对保留时间，计算10批夏天无供试品指纹图谱中各色谱峰的相对保留时间。其中11个色谱峰为各样品所共有，故标定它们