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三种灵芝不同部位活性成分含量差异性分析 　　[摘要] 目的 比较三种灵芝（霍芝1号、韩芝、日芝）不同药用部位的总多糖、总三萜、灵芝酸A及灵芝酸B的含量差异，为全面评价灵芝药材及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。 方法 采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量；香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定总三萜的含量；HPLC法测定灵芝酸A、B的含量。 结果 每种灵芝不同药用部位的总多糖含量由高到低依次为：孢子粉菌盖菌柄；每种灵芝不同药用部位的总三萜含量由高到低依次为：菌盖菌柄孢子粉；每种灵芝不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低依次为：菌盖菌柄孢子粉，且灵芝酸A的含量均明显高于灵芝酸B。 结论 该研究为全面评价灵芝子实体及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。 　　[关键词]灵芝；药用部位；总多糖；总三萜；灵芝酸 　　[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 2095-0616（2013）21-33-04 　　灵芝（Ganoderma lucidium）属担子菌门多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥子实体，是常用的滋补强壮、扶正固本中药，在中国有着悠久的药用历史。多糖和三萜类化合物是灵芝子实体及孢子粉的主要活性成分[1]。其中，灵芝多糖具有提高机体免疫能力、抗肿瘤[2]、抗癌症、抗衰老、调节血脂等药理活性，灵芝三萜类化合物具有抗肿瘤、抗HIV-1型病毒、护肝、解毒和改善记忆等活性[3-6]。从药学的角度来看，多糖和三萜类化合物含量的高低可以作为评价灵芝药用价值和品质的重要依据。灵芝由菌盖、菌柄和孢子组成，这3个部位在灵芝不同的生长阶段起着不同的功能作用，其活性成分含量也必然存在一定的差异。因此，本研究对3种灵芝不同药用部位的总多糖、总三萜及主要三萜酸类成分灵芝酸A和灵芝酸B进行含量测定，为灵芝质量评价及开发利用提供科学的依据。 　　1 材料、仪器及试剂 　　霍芝1号、韩芝和日芝子实体及孢子粉采自安徽霍山县（位于北纬31°03′-31°33′，东经115°52′-116°32′之间）灵芝种植基地，由安徽衡济堂灵芝产业开发有限公司提供。将霍芝1号、韩芝、日芝子实体用清水洗净后晾干，将其分为菌盖和菌柄两部分与孢子粉于50℃烘干，菌盖及菌柄分别粉碎后备用。 　　KQ-250E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；AB265-S/10万电子天平（梅特勒-托利公司）；TU-1900型紫外-可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；美国Waters型高效液相色谱仪；标准品灵芝酸A，灵芝酸B（上海同田生化技术有限公司提供，纯度均在98%以上）；齐墩果酸及葡萄糖对照品（中国药品生物制品检定所）；乙腈（色谱纯）；重蒸馏水；氯仿、硫酸甲酸、石油醚、乙酸乙酯、无水乙醇、无水甲醇等试剂均为分析纯。 　　2 方法 　　2.1 总多糖含量测定 　　2.1.1 标准曲线制作 精密称取在105℃干燥至恒重的葡萄糖对照品5mg，加水溶解并定容至50mL，即得浓度为0.1mg/mL的对照品溶液。分别精密量取对照品溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0mL于15mL具塞试管中，加水至2.0mL，再加入1mL 5%苯酚和5.0mL浓硫酸，摇匀，置于沸水中水浴20min，取出冰浴冷却10min，以相应的试剂为空白对照。在490nm处测定吸收度，以葡萄糖的质量（μg）为横坐标，以吸收度为纵坐标，得标准曲线Y=0.0064x+0.0071，R2=0.9991。 　　2.1.2 供试品溶液制备及含量测定 取样品粉末约2g，精密称定，置索氏提取器中，加水90mL，电加热器加热回流提取至提取液无色，提取液转移至100mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，精密量取10mL，加入乙醇150mL，摇匀，4℃放置12h，取出，离心，倾去上清液，沉淀加水溶解，转移至50mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液2mL，至15mL具塞试管中，按照标准曲线的制备项下的方法，自“精密加入苯酚1mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中含葡萄糖的重量并计算含量。 　　由表1可知，霍芝1号、韩芝及日芝的不同药用部位总多糖含量高低均表现为：孢子粉菌盖菌柄，其中孢子粉中总多糖含量明显高于菌盖和菌柄中总多糖含量。不同灵芝的菌盖中总多糖含量高低依次是：霍芝1号韩芝日芝；不同灵芝的菌柄中总多糖含量高低依次是：霍芝1号韩芝日芝；不同灵芝的孢子粉中总多糖含量高低依次是：日芝霍芝1号韩芝。见表1。 　　2.2 总三萜含量测定 　　2.2.1 标准曲线制作 精密称取齐墩果酸对照品13.65mg，置于50mL容量瓶中，加无水乙醇溶解定容至刻度，得0.273mg/mL齐墩果酸对照品溶液。精密吸取齐墩果酸